lncRNA BACE1-AS通过调控miR-6805-5p/IRF3轴影响细胞凋亡延缓微小隐孢子虫增殖的分子机制

　　这篇研究揭示了宿主lncRNA BACE1-AS在微小隐孢子虫（C. parvum）感染中的关键作用：通过NF-κB信号通路下调后，BACE1-AS通过竞争性结合miR-6805-5p解除其对IRF3的抑制，进而调控BCL2介导的细胞凋亡，最终延缓寄生虫增殖。该发现为隐孢子虫病（cryptosporidiosis）的防治提供了新靶点，填补了宿主非编码RNA（lncRNA）与寄生虫互作机制的空白。

　　

lncRNA BACE1-AS调控微小隐孢子虫感染的分子机制

ABSTRACT
微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）是重要的人畜共患病原体，可导致严重腹泻。本研究首次发现宿主lncRNA BACE1-AS在感染过程中显著下调，并通过miR-6805-5p/IRF3轴调控细胞凋亡，从而影响寄生虫增殖。这一发现为理解宿主与隐孢子虫的互作机制提供了新视角。

INTRODUCTION
隐孢子虫病在全球范围内造成严重疾病负担，但目前缺乏有效疫苗和药物。近年研究发现，长链非编码RNA（lncRNA）在宿主防御中起关键作用。前期研究表明C. parvum感染可改变宿主lncRNA表达谱，但具体机制尚不明确。本研究聚焦于显著下调的BACE1-AS，探究其在隐孢子虫感染中的功能。

MATERIALS AND METHODS
采用HCT-8细胞建立体外感染模型，通过RT-qPCR、Western blot、荧光原位杂交（FISH）和双荧光素酶报告基因检测等技术，系统分析了BACE1-AS的表达调控机制。通过过表达和干扰实验验证了BACE1-AS/miR-6805-5p/IRF3轴的功能，并利用流式细胞术检测细胞凋亡水平。

RESULTS

1. NF-κB通路介导BACE1-AS下调
   C. parvum感染后8-48小时内BACE1-AS表达持续下降，最低点出现在8小时。LPS刺激可模拟这种下调，而NF-κB抑制剂PDTC能逆转该效应。值得注意的是，弓形虫（T. gondii）和犬新孢子虫（N. caninum）感染未引起类似变化，表明这种调控具有病原特异性。

2. BACE1-AS抑制寄生虫增殖
   过表达BACE1-AS显著降低寄生虫热休克蛋白70（hsp70）基因表达和免疫荧光检测的感染率，而干扰BACE1-AS则产生相反效果。FISH定位显示BACE1-AS主要分布在细胞核外，提示其可能通过"海绵吸附"机制发挥作用。

3. miR-6805-5p/IRF3轴的发现
   从205个预测miRNA中筛选出12个高匹配候选，最终确认miR-6805-5p是BACE1-AS的直接靶标。双荧光素酶实验证实两者存在特异性结合。进一步研究发现miR-6805-5p可靶向抑制IRF3表达，而BACE1-AS通过吸附miR-6805-5p解除这种抑制。

4. BCL2介导的凋亡调控
   该轴最终通过调控BCL2蛋白表达影响细胞凋亡：过表达BACE1-AS或IRF3可促进凋亡并抑制寄生虫增殖，而抑制miR-6805-5p则产生同样效果。Western blot证实BCL2是该通路的关键效应分子。

DISCUSSION
本研究首次阐明BACE1-AS在隐孢子虫感染中的调控网络。与阿尔茨海默病和癌症中的报道不同，BACE1-AS在寄生虫感染中通过独特的miR-6805-5p/IRF3/BCL2轴发挥作用。这一发现为理解lncRNA在宿主-寄生虫互作中的多样性功能提供了新证据。

IMPORTANCE
该研究不仅揭示了隐孢子虫调控宿主细胞凋亡的新机制，还为开发抗隐孢子虫药物提供了潜在靶点。特别是BACE1-AS/miR-6805-5p/IRF3轴可能成为治疗干预的新突破口，对解决当前硝唑尼特（nitazoxanide）治疗无效的临床困境具有重要意义。