巨噬细胞源性胞外膜囊泡中大肠杆菌蛋白的炎症传递机制及其在感染性疾病中的意义

　　本研究揭示了大肠杆菌（E. coli）感染巨噬细胞后，其胞外膜囊泡（EVs）通过携带63种细菌蛋白（如OmpA、GroL1等）触发未感染细胞的促炎反应，而热灭活细菌的EVs无此效应。通过超速离心联合LC-MS/MS技术，首次系统解析了EVs中细菌蛋白的组成特征（含23种外膜蛋白），为感染性炎症疾病的分子机制提供了新视角。

　　

ABSTRACT
胞外膜囊泡（EVs）作为急性/慢性炎症疾病的关键介质，本研究通过对比活菌与热灭活大肠杆菌（E. coli DH5α）感染的巨噬细胞EVs，发现仅活菌感染组EVs携带63种细菌源性蛋白（如醛醇脱氢酶AdhE、外膜蛋白OmpA等），并通过LC-MS/MS系统鉴定其分子特征。

ANNOUNCEMENT
实验采用RAW264.7巨噬细胞，分别用活菌或75°C灭活20分钟的E. coli处理，通过差速离心（2,000×g至100,000×g）结合0.2 μm过滤获得EVs。蛋白质组学分析显示：

1. 活菌感染EVs（EC-EV）含66种E. coli蛋白，显著高于热灭活组（HI-EV，仅3种）和未感染对照组（n9f9-EC，0种）；
2. 关键蛋白包括外膜转运体（TolC、FepA）、伴侣蛋白（GroL1、Skp）及核糖体组分（RpsD、RplQ）；
3. GO注释显示23种外膜蛋白、5种质膜蛋白参与炎症信号传递。

ACKNOWLEDGMENTS
研究获日本JSPS基金（JP17K08836、JP20K07481）及大阪大学微生物病研究所合作项目支持，质谱分析由斋藤、高田、杉原博士团队完成。

亮点解析：

1. 技术突破：采用HCD碰撞能量35%的Orbitrap Velos质谱，实现<10 ppm质量精度，通过Scaffold4软件定量（蛋白阈值99.9%）；
2. 生物学意义：首次证实活菌特异性EVs蛋白（如FimA型菌毛蛋白）可能通过Toll样受体通路激活免疫反应；
3. 数据共享：蛋白质组数据已公开于jPOST（ID:JPST003542）。

注：所有数据均来自原文实验，未感染对照组EVs中未检出任何细菌蛋白，强烈提示活菌代谢活性对EVs cargo分选的关键调控作用。