猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体化学发光检测方法的建立与应用

　　 摘要: 【背景】猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的母猪流产或死胎、仔猪呼吸道症状并伴随死亡率升高的一种传染性疾病

　　 摘要:

【背景】猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的母猪流产或死胎、仔猪呼吸道症状并伴随死亡率升高的一种传染性疾病。【目的】建立一种特异性强、灵敏度高、操作简捷、检测时间短的PRRSV抗体化学发光检测方法，用于检测PRRSV抗体水平。【方法】以羧基磁珠作为固相载体偶联PRRSV重组N蛋白，用适量的牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)进行封闭，加入检测样品进行反应，以兔抗猪IgG-AP抗体作为酶标二抗，加入相应底物进行显色，优化各项反应条件，建立PRRSV抗体化学发光检测方法，并对该方法的特异性、灵敏度、重复性和符合率进行验证。【结果】建立的PRRSV抗体化学发光检测方法的血清样品稀释倍数为1:30，蛋白与羧基磁珠偶联pH值为8.0，蛋白偶联量为20 μg/mL，使用20 μL 10% BSA溶液封闭最佳，磁珠稀释液用量为1 mL，酶标二抗稀释度为1:20 000，一步反应时间为20 min，二步反应时间为10 min，底物反应时间为3 min。根据背景清晰的PRRSV临床血清样本制标准曲线，通过绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线确定阴阳临界点为32.56 U，当临床PRRSV抗体阳性样品稀释到4倍时，ELISA和化学发光检测方法均鉴定为阴性，说明该化学发光检测方法具有良好的灵敏度。与非洲猪瘟病毒、经典猪瘟病毒、猪乙脑病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒抗体阳性血清均无交叉反应。重复性试验中，批内变异系数为2.79%-5.32%，批间变异系数为1.05%-11.31%，均<15%，与商品化猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒阳性符合率93.8%，阴性符合率96.3%，总符合率96.1%。【结论】本研究建立的PRRSV抗体化学发光检测方法可用于PRRSV疫苗接种后或感染痊愈后抗体水平检测，为后续试剂盒的开发提供参考。