摘要: Nutlin-3是代表性小分子MDM2-p53拮抗剂, 能通过破坏p53和MDM2的相互作用, 稳定p53状态, 从而诱导p53信号通路发挥抗肿瘤作用。本研究以HCT-116、H460、HepG2、MCF-7、A549、SJSA-1六种野生型p53肿瘤细胞系为研究对象, 采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT) 法、平板克隆实验检测nutlin-3对6种不同野生型p53癌细胞增殖的影响; 通过流式细胞术检测nutlin-3对H460细胞周期和细胞凋亡的影响; 通过蛋白印迹实验检测泛素特异蛋白酶7 (ubiquitin-specific protease 7, USP7)、细胞死亡结构域相关蛋白(death domain-associated protein, DAXX)、鼠双微体2 (murine double minute 2, MDM2)、鼠双微体4 (murine double minute 4, MDMX/MDM4)、p53的表达, 探讨nutlin-3的抗肿瘤作用机制; 通过免疫共沉淀(co-immunoprecipitation, Co-IP) 实验检测nutlin-3对MDM2与MDMX、p53相互作用的影响。结果显示, nutlin-3呈时间和浓度依赖性地抑制H460的增殖; 细胞周期和凋亡结果显示, nutlin-3能阻滞H460细胞周期于G0/G1期, 通过激活cleaved-PARP并诱导细胞凋亡; 蛋白印迹结果显示, nutlin-3能够上调H460细胞中USP7、DAXX、MDM2、MDMX、p53蛋白的表达; Co-IP结果表明, nutlin-3抑制MDM2与p53、MDM2与MDMX的蛋白相互作用。综上所述, nutlin-3能够显著抑制野生型p53癌细胞的增殖, 并诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡, 其机制可能与破坏MDM2/MDMX与p53相互作用, 从而激活MDM2-p53信号通路有关。
