RPA-CRISPR/Cas12a结合重力驱动微流控芯片的MTB快检方法的建立

　　 摘要： 目的 开发一种快速高效的结核分枝杆菌（MTB）检测方法，给基层单位、偏远地区的结核病（Tuberculosis）快速筛查提供技术方案，更好地开展结核病的防治工作

　　

摘要：

目的 开发一种快速高效的结核分枝杆菌（MTB）检测方法，给基层单位、偏远地区的结核病（Tuberculosis）快速筛查提供技术方案，更好地开展结核病的防治工作。 方法 设计RPA引物、crRNA，并引入重力驱动的微流控芯片，建立RPA-CRISPR/Cas12a的片上检测方法，进一步分析该方法的灵敏度与特异性，使用疑似结核病患者的样本进行片上检测和痰培养，比较建立的方法与痰培养法的一致性。 结果 建立的RPA-CRISPR/Cas12a片上检测方法可在30 min内实现MTB检测，LOD为1 copies/μL。以痰培养鉴定为参考标准，片上检测法的灵敏度为91.11%，特异度为94.34%，阳性预测值为93.19%，阴性预测值为92.59%，准确性为92.86%，Kappa值为0.856。 结论 建立的RPA-CRISPR/Cas12a的片上检测法的灵敏度、特异性高，并且快速、简单、便捷。