球炭疽菌果胶酸裂解酶基因CcPL20552克隆及表达分析

　　 摘要： 目的 基于RNA-Seq数据，果胶酸裂解酶候选效应蛋白基因CcPL20552为球炭疽菌致病过程中致病基因之一，且具有效应蛋白的特征

　　

摘要：

目的 基于RNA-Seq数据，果胶酸裂解酶候选效应蛋白基因CcPL20552为球炭疽菌致病过程中致病基因之一，且具有效应蛋白的特征。研究CcPL20552基因信号肽功能及其蛋白表达特点，为揭示其基因功能提供依据，也为揭示球炭疽菌的分子致病机制奠定基础。 方法 以球炭疽菌侵染的马铃薯茎秆cDNA为模板，克隆CcPL20552基因CDS编码区全长以及去除信号肽（-SP）序列，构建带有His标签的全长融合表达载体pET28a-PL20552和去信号肽融合表达载体pET28a-SP 20552，于大肠杆菌BL21（DE3）中通过自诱导和IPTG诱导表达，纯化蛋白后测定其浓度及活性。 结果 CcPL20552基因编码区全长为720 bp，蛋白质预测分子量为24.48 kD，且包含一段由18个氨基酸组成的信号肽序列，蛋白主要以包涵体形式存在于裂解后的菌体沉淀中，通过变复性并利用His标签纯化出目的蛋白，相同诱导条件下全长蛋白表达量显著高于去除信号肽蛋白表达量，100 mmol/L浓度的咪唑洗脱液为最适洗脱浓度，全长和去信号肽蛋白浓度分别为224.25和174.02 μg/mL，活性分别为0.634 6和0.952 0 U/mL。 结论 CcPL20552基因可通过自诱导和IPTG诱导表达，温度越低蛋白表达量越高，信号肽对该蛋白表达影响较大，且信号肽具有分泌功能。