调控棘孢木霉几丁质酶Tachi2基因的转录因子和蛋白的互作研究

　　 摘要： 目的 生防菌棘孢木霉（Trichoderma asperellum）TD3104产生的几丁质酶Tachi2在植物病害防治过程中发挥重要作用，47号转录因子作用于特异响应几丁质诱导的Tachi2基因启动子顺式作用元件

　　

摘要：

目的 生防菌棘孢木霉（Trichoderma asperellum）TD3104产生的几丁质酶Tachi2在植物病害防治过程中发挥重要作用，47号转录因子作用于特异响应几丁质诱导的Tachi2基因启动子顺式作用元件。探究47号转录因子与一种新调控蛋白H63的互作关系，为解析几丁质诱导调控基因转录表达机制提供科学依据。 方法 利用酵母双杂交系统对棘孢木霉几丁质酶基因Tachi2中47号转录因子的候选互作蛋白H63进行体内点对点互作鉴定；采用大肠杆菌表达系统分别对H63蛋白与47号转录因子基因进行原核诱导表达，利用亲和层析技术纯化融合蛋白，通过GST pull-down实验进行体外蛋白互作检测；利用农杆菌介导的洋葱表皮细胞亚细胞定位技术和BiFC实验进一步检测细胞内蛋白的相互作用。 结果 H63蛋白与47号转录因子在酵母细胞内存在互作关系；原核表达的重组H63蛋白、47号转录因子大小分别为36 kD和18 kD，二者在体外存在互作关系；成功构建了双分子荧光互补载体，证实H63蛋白与47号转录因子在洋葱内表皮细胞中存在相互作用，并且互作发生在细胞核内。 结论 证实H63蛋白与47号转录因子在细胞内外均存在相互作用，为解析真菌几丁质酶基因的表达调控、几丁质酶在农业和生物医药领域的开发利用奠定理论基础。