干扰lncRNA RNF5-AS1对奶牛乳腺上皮细胞炎症反应的影响

　　 摘要： 目的 长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）能够通过直接调控下游分子或竞争性结合微小RNA（microRNA, miRNA）参与奶牛乳房炎症过程

　　

摘要：

目的 长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）能够通过直接调控下游分子或竞争性结合微小RNA（microRNA, miRNA）参与奶牛乳房炎症过程。lncRNA RNF5-AS1是新发现的lncRNA，旨在分析lncRNA RNF5-AS1在奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells, bMECs）炎症反应中的作用。 方法 利用RT-PCR技术进行lncRNA RNF5-AS1的克隆，采用核质分离法探究其在bMECs中的亚细胞定位情况。采用脂多糖（lipopolysaccharides, LPS）诱导bMECs建立炎症模型，并利用RT-qPCR检测lncRNA RNF5-AS1在炎性bMECs中的表达水平；干扰lncRNA RNF5-AS1后，检测促炎细胞因子表达水平，并利用CCK-8法和EdU法分别评估细胞活力和增殖能力；通过流式细胞术分析细胞凋亡情况。进一步通过在线工具预测lncRNA RNF5-AS1的潜在靶基因。 结果 lncRNA RNF5-AS1长度为1 125 bp，主要分布于细胞质中。在LPS诱导的bMECs炎症模型中，lncRNA RNF5-AS1表达水平显著上调；干扰lncRNA RNF5-AS1后，促炎因子IL-6和IL-8的表达水平显著下调，细胞活力和增殖能力显著增加，细胞凋亡水平极显著降低。KEGG结果表明，lncRNA RNF5-AS1可能通过靶向bta-miR-375、bta-miR-615、bta-miR-193a-5p、bta-miR-1291和bta-miR-1468而调控细胞炎症反应。 结论 lncRNA RNF5-AS1在bMECs炎症反应中表达上调，干扰后会抑制促炎因子的表达和细胞凋亡，提升细胞活力和增殖能力，提示其参与奶牛乳房炎的调控。