一种高效花生遗传转化体系的建立与优化

　　摘要： 为建立高效的农杆菌介导的花生(Arachis hypogaea)遗传转化体系, 选取了11个花生品种, 从中筛选出胚小叶芽丛诱导率最高的品种胚小叶为试验材料, 通过对农杆菌菌株、菌液OD值、AS (乙酰丁香酮)浓度、表面活性剂浓度、侵染方式及时间、共培养时间等影响因素进行筛选并优化, 获得花生胚小叶转基因植株

　　摘要： 为建立高效的农杆菌介导的花生(Arachis hypogaea)遗传转化体系, 选取了11个花生品种, 从中筛选出胚小叶芽丛诱导率最高的品种胚小叶为试验材料, 通过对农杆菌菌株、菌液OD值、AS (乙酰丁香酮)浓度、表面活性剂浓度、侵染方式及时间、共培养时间等影响因素进行筛选并优化, 获得花生胚小叶转基因植株。结果显示: 以花育9133胚小叶为受体, 利用含有eGFP (绿色荧光蛋白)和含GUS (β-葡萄糖苷酸酶)蛋白的重组农杆菌侵染转化, 发现侵染液为MS液体+LBA4404菌株+100 μmol?L^-1 AS+150 mg?L^-1表面活性剂Silwet-77+菌液OD600为0.7时, 侵染方式为抽真空15 min+浸泡20 min+共培养4 d时花生转化率最高, CaMV 35S:eGFP、AhUBQ4:GUS阳性率分别为52.67%、57.67%。经组织培养法诱导的转化再生植株, 其中含eGFP蛋白的经eGFP绿色荧光和PCR检测鉴定为转基因阳性植株, 含GUS蛋白的经GUS染色和PCR检测鉴定为转基因阳性植株。该研究成功建立并优化了花生遗传转化体系, 为花生基因功能研究、抗性品种的培育、品质改良、生物技术研究等提供参考。