猪流行性腹泻病毒减毒活疫苗的研发：基于基因修饰的母婴免疫保护策略

　　为解决猪流行性腹泻病毒(PEDV)对新生仔猪的高致死率问题，研究人员通过反向遗传学技术构建了携带ORF3缺失(△ORF3)、刺突蛋白N端唾液酸结合域缺失(SΔN)及基因重排(ESMN)的重组病毒。研究发现SΔN修饰显著降低病毒毒力，但母体接种后未能有效诱导乳汁IgA免疫保护。该研究为平衡减毒活疫苗安全性与免疫原性提供了关键数据，发表于《npj Vaccines》。

　　

猪流行性腹泻病毒(PEDV)是近年来全球养猪业的头号威胁之一，尤其对新生仔猪造成高达100%的死亡率。传统疫苗对流行毒株保护效果有限，而通过母体接种诱导乳汁免疫（lactogenic immunity）被认为是保护仔猪的关键策略。然而，如何平衡减毒活疫苗在新生仔猪中的安全性与母猪肠道内的有效复制能力，成为疫苗研发的核心矛盾。

荷兰乌得勒支大学等机构的研究团队基于当代流行毒株GDU，利用靶向RNA重组技术构建了6种基因修饰病毒：修复ORF3的野生型(rPEDV)、ORF3缺失株(△ORF3)、刺突蛋白N端域缺失株(S^ΔN)，以及这些突变与结构基因重排(ESMN)的组合体。通过新生仔猪攻毒实验发现，仅携带S^ΔN修饰的病毒能完全避免死亡率，但导致中度腹泻；而基因重排进一步减轻临床症状。值得注意的是，尽管S^ΔN病毒能在6周龄仔猪中诱导IgG/IgA应答，母猪口服接种后却未能检测到肠道病毒复制，导致乳汁IgA缺失，最终无法保护仔猪抵抗强毒攻击。该研究揭示了PEDV减毒活疫苗开发中"安全性与免疫原性不可兼得"的困境，相关成果发表于《npj Vaccines》。

关键技术包括：1) 基于Vero细胞的病毒培养与TCID₅₀滴定；2) 靶向RNA重组技术构建基因修饰病毒；3) 新生仔猪与妊娠母猪的阶梯式动物实验；4) 直肠拭子qPCR检测病毒载量；5) S1-ELISA定量血清IgA/IgG。

结果部分
病毒构建与体外特性
RT-PCR和免疫荧光证实所有重组病毒正确构建。生长曲线显示S^ΔN病毒复制延迟，而rPEDV-S^ΔN-△ORF3-ESMN滴度降低2个对数级。

新生仔猪毒力评估
野生型rPEDV感染导致100%死亡率，△ORF3未显示减毒效果。S^ΔN系列病毒实现零死亡，但rPEDV-S^ΔN仍引起严重腹泻。基因重排使rPEDV-△ORF3-ESMN死亡率降至50%。

免疫应答特征
所有存活仔猪均产生S1特异性抗体，加强免疫后效价提升。S^ΔN病毒在6周龄猪中诱导更强应答，但肠道病毒脱落量显著低于新生仔猪。

母体免疫失败原因
疫苗接种母猪虽产生血清IgG，但结肠病毒RNA检测阴性，乳汁IgA缺失。攻毒后仔猪腹泻评分、病毒载量与对照组无差异。

结论与意义
该研究首次系统评估了基因修饰对PEDV毒力的层级影响：S^ΔN是核心减毒位点，而ORF3缺失需结合基因重排才能增效。值得注意的是，S^ΔN虽能安全用于新生仔猪，却因无法在母猪肠道有效复制，导致乳汁IgA缺如——这解释了为何强效的血清IgG应答未能转化为保护力。这一发现为后续疫苗设计指明方向：或需开发能靶向肠道淋巴组织的递送系统，或采用非复制型疫苗（如病毒载体）来突破现有技术瓶颈。研究同时证实，仔猪年龄显著影响PEDV易感性，提示母婴免疫的时间窗口可能比既往认知更狭窄。这些发现不仅对PED防控具有实践指导价值，也为其他冠状病毒减毒疫苗研发提供了重要参考。