离子脂质体封装TLR7/8激动剂INI-4001对H7流感抗原特异性免疫应答的影响研究

　　本研究针对TLR7/8激动剂系统性毒性及药代动力学差的临床转化难题，通过将新型脂化激动剂INI-4001封装于不同电荷特性的离子脂质体中，系统评估了其对H7N9流感血凝素抗原的佐剂效应。研究发现阳离子DOPC/DC-Chol脂质体在降低细胞毒性的同时显著增强TNF-α分泌，而阴离子DOPG/Chol脂质体单次免疫即可诱导高水平抗体滴度。该研究为开发安全有效的流感亚单位疫苗提供了重要技术路径。

　　

流感疫苗研发领域长期面临一个重要挑战：如何在不增加不良反应的前提下增强亚单位疫苗的免疫原性。传统灭活疫苗虽然免疫效果良好，但存在生产周期长、批次差异大等缺点；而现代亚单位疫苗虽然安全性高、易于标准化生产，却常因缺乏病原体相关分子模式而免疫原性不足。这一矛盾在应对流感大流行时尤为突出，亟需开发新型佐剂系统来平衡安全性与有效性。

美国蒙大拿大学转化医学中心（Center for Translational Medicine-Adjuvant Research Team, University of Montana）的Fatemeh Mehradnia和Hardik Amin等研究人员将目光投向Toll样受体（TLR）激动剂这一明星分子家族。TLR7/8作为识别病毒单链RNA的关键模式识别受体，能激活树突细胞和巨噬细胞，促进Th1型免疫应答。然而水溶性TLR7/8激动剂存在注射部位反应和全身毒性等问题。研究团队创新性地采用脂化策略，将新型TLR7/8激动剂INI-4001封装于不同电荷特性的脂质体中，系统评估了其对重组H7N9流感血凝素抗原（H7）的佐剂效应，相关成果发表在《Drug Delivery and Translational Research》。

研究主要采用薄层水化-超声法制备七种不同电荷特性的脂质体，通过动态光散射和冷冻电镜表征理化性质；采用RP-HPLC定量INI-4001包封率；利用hPBMCs（人外周血单个核细胞）评估细胞毒性和先天免疫激活；最后通过小鼠免疫实验检测H7特异性抗体和细胞免疫应答。

在"Characterization of liposomes"部分，研究显示所有脂质体粒径均小于80nm，PDI为0.118-0.274。冷冻电镜证实除DOTAP/Chol形成多层结构外，多数为单层脂质体。阳离子DOEPC/Chol和阴离子DOPG/Chol表现出最高包封率（85.6%和81.3%），而DOTAP+DDAB/Chol仅35.5%。稳定性测试表明除DOTAP基脂质体外，其他配方在4℃和25℃下可稳定保存3个月。

"Assessment of colloidal stability"揭示温度对稳定性的关键影响。40℃储存时，含阳离子结构脂质（如DOEPC、DOTAP）的配方易失去结构完整性，而含阳离子固醇脂质（DC-Chol、GL-67）的脂质体保持稳定。阴离子DOPG/Chol脂质体虽粒径稳定，但Zeta电位从-46mV降至-21mV，提示表面基团动态重排。

"In vitro cytotoxicity"数据显示中性（DOPC/Chol）和阴离子（DOPG/Chol）脂质体细胞毒性最低。在免疫激活方面，阳离子固醇脂基配方（DOPC/DC-Chol和DOPC/GL-67）诱导最强TNF-α分泌，而阳离子结构脂基配方（DOEPC/Chol和DOTAP+DDAB/Chol）更擅长诱导IFN-α。值得注意的是，阴离子DOPG/Chol在10μM以上浓度也能显著促进TNF-α产生。

"In vivo immunogenicity evaluation"部分结果最为亮眼：阴离子DOPG/Chol单次免疫即产生最高H7特异性IgG滴度，阳离子DOPC/DC-Chol则在加强免疫后展现优势。细胞免疫分析显示，除DOTAP+DDAB/Chol外，所有INI-4001脂质体均显著增强IFN-γ分泌。特别是DOPC/DC-Chol同时提升TNF-α和IFN-γ，且不诱导IL-17A，呈现理想Th1极化特征。

这项研究的重要意义在于：首次系统比较了不同电荷特性脂质体对TLR7/8激动剂佐剂效应的影响，发现阳离子DOPC/DC-Chol脂质体在平衡安全性与免疫原性方面表现突出，而阴离子DOPG/Chol则适合需要快速免疫应答的场景。研究为流感亚单位疫苗设计提供了重要指导原则——通过精确调控脂质组成和表面电荷，可以定向优化Th1型免疫应答，这对防控H7N9等高致病性流感病毒具有重要应用价值。该策略还可拓展至其他RNA病毒疫苗开发，如SARS-CoV-2、寨卡病毒等新兴传染病防控领域。