中药复方养肝益中汤通过调节肠道菌群-胆汁酸代谢轴靶向髓系抑制细胞预防结直肠癌肝转移的机制研究

　　本研究揭示了传统中药复方养肝益中汤（YGYZ）预防结直肠癌（CRC）肝转移（LM）的创新机制。通过UPLC-HR-MS/MS鉴定出95种活性成分，证实YGYZ通过重塑肠道菌群（GM）结构（降低梭菌属丰度）、协同抑制KLF15调控肝胆胆汁酸（BAs）循环，并经由IL-6/STAT3通路抑制髓系来源抑制细胞（MDSCs）增殖活化，从而改善肝脏转移前微环境（PMN）。动物实验显示YGYZ显著减少肝转移灶（p<0.01），提高CD4+/CD8+ T细胞比值，为中医药"肝脾同调"理论提供了现代科学阐释。

　　

引言

结直肠癌肝转移（LM）在临床中发生率高达40-50%，现有治疗手段受限于耐药性和副作用。养肝益中汤（YGYZ）作为基于"肝脾同调"原则的中药复方，在临床中展现出预防LM的潜力。研究采用ct26-luc小鼠模型，结合多组学技术探索YGYZ通过肠道菌群（GM）-胆汁酸（BAs）-免疫轴的作用机制。

材料与方法

通过超高效液相色谱-高分辨质谱（UPLC-HR-MS/MS）鉴定出YGYZ中95种化合物，包括甘草酸、佛手柑素和淫羊藿苷等关键成分。建立脾内注射ct26-luc细胞的LM模型，设置假手术组、模型组、卡培他滨组（Cap）及YGYZ高/中/低剂量组。采用粪便微生物移植（FMT）、16S rRNA测序和BAs代谢组学分析GM变化，通过流式细胞术检测髓系来源抑制细胞（MDSCs）亚群（CD11b⁺Ly6G⁺和CD11b⁺Ly6C⁺），Western blot检测KLF15和STAT3蛋白表达。

结果

YGYZ安全抑制LM进展

YGYZ-H组肝转移结节数较模型组减少63%（p<0.001），Ki-67阳性细胞降低52%。血清ALT/AST水平显示肝脏保护作用，且显著提高早期体重增长率（p<0.01）。

免疫微环境重塑

在转移前阶段（第12天），YGYZ-H使PMN-MDSCs比例下降47%，G-MDSCs降低39%；转移阶段（第24天）CD11b⁺Ly6G⁺细胞减少58%。免疫抑制因子Arg-1、TGF-β和IL-10水平均显著降低（p<0.01），CD4⁺/CD8⁺ T细胞比值提升2.1倍。

肠道菌群调控

YGYZ使厚壁菌门/拟杆菌门比值提高3.2倍，梭菌属丰度降低68%（p<0.01），同时增加阿克曼菌（Akkermansia）和乳酸杆菌（Lactobacillus）等有益菌。FMT组呈现相似菌群改变模式。

胆汁酸代谢重编程

肝脏中初级BAs（NorCA、TCA）含量增加1.8-2.4倍，次级BAs UDCA上升3.1倍；而粪便中UDCA降低61%。相关性分析显示TCDCA与梭菌属呈负相关（r=-0.72, p<0.01）。

关键通路验证

YGYZ特异性下调KLF15蛋白表达（降低54%），而FMT无此效应。两者共同抑制IL-6分泌（减少63%）和STAT3磷酸化（pSTAT3降低71%），阻断MDSCs活化通路。

讨论

研究首次揭示YGYZ通过"GM-BAs-KLF15"三轴调控预防LM的机制：①GM重构减少促癌梭菌属，增加免疫调节菌；②KLF15抑制协同调节肝胆BAs循环；③IL-6/STAT3通路抑制减轻MDSCs介导的免疫抑制。其中UDCA和T-β-MCA等BAs成分可能通过调控NKT细胞功能影响转移前生态位形成。

结论与展望

YGYZ作为多靶点调控体系，为LM预防提供了新策略。未来需明确KLF15与特定BAs的定量关系，优化FMT方案，并分离鉴定关键活性成分。该研究为中医药现代化研究提供了典型范式。