地衣提取物与替莫唑胺协同逆转胶质母细胞瘤耐药性的机制研究：聚焦Wnt信号通路调控

　　本研究揭示了地衣Evernia prunastri代谢产物松萝酸（EA）通过调控Wnt/β-catenin信号通路增强U-87胶质母细胞瘤（GBM）细胞对替莫唑胺（TMZ）敏感性的新机制。实验证实EA-TMZ组合可下调WNT5A/FZD7等关键基因表达，同时上调Wnt抑制因子WIF1蛋白释放，协同抑制MAPK/PI3K通路磷酸化，使TMZ剂量降低3.4倍。该发现为克服GBM化疗耐药提供了新型天然佐剂研发策略。

　　

【Introduction】

胶质母细胞瘤（GBM）和乳腺癌（BC）作为两大高致死率肿瘤，其治疗面临替莫唑胺（TMZ）和紫杉醇（PTX）耐药的严峻挑战。研究表明，地衣共生体产生的次级代谢产物具有独特生物活性。本研究聚焦橡苔（Evernia prunastri）和鹿蕊（Cladonia arbuscula）两种地衣，探究其提取物及特征性代谢物松萝酸（EA）、松萝酸（UA）与标准化疗药物的协同效应。

【Materials and methods】

采用TMZ耐药型U-87胶质瘤细胞、MCF7乳腺癌细胞及正常人皮肤成纤维细胞（HSKF）模型。通过顺序溶剂萃取获得地衣的己烷（Hex）、二氯甲烷（DCM）和乙腈（ACN）提取物。运用ChemGPS-NP化学空间定位预测EA作用靶点，结合Western blot验证MAPK通路蛋白表达，RNA测序分析差异基因，ELISA检测Wnt抑制因子WIF1分泌。协同效应采用组合指数（CI）和零相互作用效力（ZIP）模型量化。

【Results】

1. 1.

   选择性细胞毒性：

   EprACN提取物（IC₅₀ 30 μg/mL）和EA对U-87细胞展现剂量依赖性代谢抑制，且对HSKF安全性良好。UA对MCF7细胞活性较弱，SI值低于PTX。

2. 2.

   协同效应突破：

   EA-TMZ组合（1:16比例）实现75%代谢抑制，使TMZ剂量降低3.4倍。δ-score分析显示协同区域集中在EA（20-40 μM）与TMZ（320-580 μM）组合。

3. 3.

   多靶点机制解析：

   • 微管调控：EA下调β-微管蛋白TUBB6/TUBB2B基因表达，干扰有丝分裂进程

   • 通路抑制：Western blot显示EA持续抑制ERK1/2、c-Jun和Akt磷酸化

   • Wnt通路重塑：组合治疗显著下调WNT5A/FZD7表达，上调CTNNBIP1，并促进WIF1蛋白分泌（EA35TMZ320组提升3.2倍）

   • 炎症调控：EA-TMZ上调BDNF表达但未激活促炎因子IL6/IL10

【Discussion】

该研究首次揭示EA通过三重机制增敏TMZ：1）化学空间定位提示其干扰微管动力学；2）抑制MAPK/PI3K生存信号；3）特异性调控Wnt通路关键节点。特别值得注意的是，耐药细胞中IL17RC受体的独特表达模式为耐药机制研究提供了新方向。虽然体外实验显示EA在特定浓度可上调WNT3，但组合治疗通过WIF1蛋白分泌的剂量依赖性调节实现了通路平衡。

【Summary and conclusion】

地衣代谢物EA展现出作为TMZ佐剂的转化潜力，其通过多靶点作用克服GBM耐药性：既直接抑制肿瘤增殖相关通路，又通过表观调控重塑肿瘤微环境。未来研究需在类器官模型和血脑屏障穿透性方面深入探索，为开发基于天然产物的精准联合治疗方案奠定基础。