靶向多发性骨髓瘤的双机制杂合分子：p53激活剂与原黄酮衍生物的协同抗肿瘤效应

　　（编辑推荐）本研究创新性地设计合成11种双靶点杂合分子，通过同时激活p53通路和抑制ATR/Chk1信号通路，在多种癌细胞系（包括多发性骨髓瘤MM）中展现出纳摩尔级抗增殖活性。杂合分子较单一组分显著增强疗效，为p53突变/缺失肿瘤治疗提供新策略。

　　

1 引言

多发性骨髓瘤（MM）作为恶性浆细胞肿瘤，2022年全球病例超18万例，传统药物如卡非佐米虽获批但耐药问题突出。研究团队提出"双药杂合"策略，将靶向p53的色氨醇异吲哚酮（1-2）与抑制ATR的原黄酮（3）通过三唑连接桥结合。p53作为明星抑癌因子，其突变见于50%以上癌症，而ATR（共济失调毛细血管扩张症和Rad3相关蛋白）是DNA损伤修复关键激酶，二者协同作用可阻断肿瘤细胞增殖"双保险"。

2 结果与讨论

2.1 化学合成

通过点击化学将叠氮化异吲哚酮（4a-c,5a-c）与原黄酮炔烃（6-7）环加成，构建11种杂合分子（10-20）。核磁共振（¹H/¹³C NMR）和高分辨质谱（HRMS）证实结构，纯度均≥95%。

2.2 构效关系

在HCT116结肠癌细胞（p53^+/+ vs p53^-/-）中，杂合分子IC₅₀值较母体化合物1（15.5 μM）提升40倍，最优化合物15达0.35 μM。特别在MDA-MB-231（R280K p53突变）乳腺癌细胞中，15对突变型p53选择性优于野生型（IC₅₀ 2.0 vs 7.0 μM）。Western blot证实15特异性抑制阿霉素诱导的Chk1磷酸化（Ser345），而对UV诱导的Chk2（Thr68）无影响，表明其精准靶向ATR通路。

多发性骨髓瘤模型中，杂合分子11（IC₅₀ 0.62 μM）和17（IC₅₀ 0.43 μM）在RPMI 8226（E285K p53突变）和MM.1S（野生型p53）细胞中均优于母药组合（1+8的IC₅₀ 1.41 μM），证实杂合优势。三唑连接链长度影响显著：含3碳链的14较2碳链13活性提升2倍，但延长至聚乙二醇链（12）则活性下降。

3 结论

该研究突破性地证明双机制杂合分子可协同调控p53-ATR信号轴，对p53突变型肿瘤具有"双重打击"效应。化合物15通过"分子胶水"作用稳定p53构象，同时阻断ATR依赖的DNA修复，为临床难治性MM提供全新治疗范式。

4 实验方法

采用SRB/XTT法测定细胞毒性，Western blot分析信号通路。合成中关键步骤包括：①钠氢催化N-烷基化构建叠氮中间体；②铜催化炔-叠氮环加成（产率38-84%）；③制备型HPLC纯化（乙腈/水梯度洗脱）。所有化合物经¹H/¹³C NMR和HPLC-MS双重验证。