熊果酸靶向抑制RPLP1蛋白：揭示其抗结直肠癌作用的新机制

　　本研究针对结直肠癌(CRC)治疗中存在的药物耐药性和高转移率问题，通过TMT定量蛋白质组学技术筛选出HDW活性成分熊果酸(UA)的关键靶点RPLP1。研究发现UA通过显著下调RPLP1表达，协同抑制CRC细胞增殖、迁移并促进凋亡，为开发新型靶向疗法提供了理论依据。该成果发表于《Discover Oncology》，为中药抗肿瘤机制研究提供了蛋白质组学方法学示范。

　　

结直肠癌(CRC)作为全球癌症相关死亡的第二大原因，其治疗面临巨大挑战。尽管手术切除、放化疗和靶向治疗等手段不断发展，但药物不良反应、耐药性和高昂费用等问题依然突出。传统中药白花蛇舌草(Hedyotis Diffusa Willd, HDW)因其多靶点作用特点，在抗CRC领域展现出独特优势，但其关键活性成分和作用机制尚未完全阐明。

为揭示HDW抗CRC的物质基础，Li-Min Zhu团队采用CCK-8法筛选出三萜类化合物熊果酸(Ursolic Acid, UA)作为核心活性成分，其半数抑制浓度(IC₅₀)显著优于齐墩果酸和槲皮素。研究创新性地运用串联质量标签(Tandem Mass Tag, TMT)定量蛋白质组学技术，在SW480细胞中鉴定出804个差异表达蛋白(DEPs)，其中核糖体蛋白RPLP1被确定为UA的关键作用靶点。通过高内涵筛选、基因沉默和功能实验的多维度验证，首次阐明UA通过抑制RPLP1表达，协同阻断CRC细胞的恶性生物学行为。

关键技术方法包括：1)采用CCK-8法比较HDW三种成分(UA、OA、槲皮素)的细胞毒性；2)基于TMT标记的定量蛋白质组学分析UA处理后的蛋白表达谱；3)通过shRNA敲低和功能实验验证RPLP1在CRC中的作用；4)结合伤口愈合、Transwell和流式细胞术评估细胞迁移、侵袭和凋亡。

3.1 Identification of active ingredients of HDW

通过CCK-8实验证实UA对SW480细胞的增殖抑制效果最强，IC₅₀值最低，确定为后续研究的主要活性成分。

3.2 DEPs screening and functional enrichment analysis

TMT蛋白质组学发现804个DEPs(438上调/366下调)，GO分析显示这些蛋白主要参与血浆膜组成和肝素结合过程，KEGG富集于补体凝血级联等通路。

3.3 RPLP1 was identified as a gene related to CRC cell proliferation

高内涵筛选证实RPLP1敲除显著抑制HCT116细胞增殖，FC值≥2，被确定为CRC细胞增殖的正调控因子。

3.4 UA inhibited RPLP1 expression in CRC cells

qPCR显示10-20μM UA处理可显著降低CRC细胞中RPLP1 mRNA水平(P<0.01)。

3.5 RPLP1 knockdown inhibited the malignant behaviors of CRC cells

shRNA-57068敲低RPLP1后：1)CCK-8显示细胞活力下降(P<0.001)；2)克隆形成和EdU实验证实增殖能力减弱；3)Transwell和伤口愈合实验显示侵袭迁移受抑；4)流式细胞术检测到凋亡率升高。

Combination therapy effects

UA与RPLP1敲低联用产生协同效应：1)较单用UA进一步抑制细胞增殖(EdU阳性率降低38.7%)；2)迁移抑制率提高2.3倍；3)凋亡率增加1.8倍(P<0.001)。

该研究首次通过多组学整合策略揭示UA抗CRC的蛋白质靶点网络，证实RPLP1是介导UA药理作用的关键效应分子。从传统中药活性成分中发现核糖体蛋白调控肿瘤的新机制，不仅为CRC靶向治疗提供了新选择，也为中药现代化研究提供了"成分-靶点-通路"的完整解析范式。值得注意的是，UA与RPLP1抑制的协同效应提示该靶点可能成为克服化疗耐药的新突破口，但临床样本验证和动物实验仍需后续深入研究。