基于TetR变构效应的均相化学发光法快速检测牛奶中四环素类抗生素残留

　　本文推荐一种基于四环素阻遏蛋白(TetR)变构效应的均相化学发光检测新方法，通过重组表达TetR并与发光微球共价偶联，实现对牛奶中四环素类抗生素(TCs)的高灵敏检测（LOD 1.02-6.13 μg/kg）。该方法突破传统抗体法对多西环素(DOX)检测灵敏度不足的局限，其检测阈值与国际最大残留限量(MRLs)高度匹配，具备操作简便、高通量和自动化应用潜力，为乳品安全监管提供创新技术支撑。

　　

亮点

四环素阻遏蛋白-药物相互作用表征

通过分析TetR与多西环素(DOX)、金霉素(CTC)、土霉素(OTC)和四环素(TC)的共晶结构（图1）发现，所有四环素类药物的A环均嵌入TetR的疏水口袋。关键残基Asn82、His64、Gln116、Ser138和Pro105通过氢键和疏水作用参与共同识别，这解释了TetR广谱识别四环素的能力。

DOX凭借C6位甲基与Val113、Leu117形成额外疏水作用，展现出最强结合力（K_a 2.3×10¹⁰ M^-1），显著高于其他三种药物（TC 3.3×10⁹ M^-1），这种差异化的结合特性为建立符合MRLs的差异化检测提供了分子基础。

结论

本研究开发的TetR均相化学发光检测法操作简便、检测快速且通量高，其灵敏度与各国制定的MRLs高度匹配。该方法不仅为牛奶中四环素残留筛查提供了高效工具，在自动化检测系统中的应用前景尤为突出。