顶花板凳果中三种新孕甾烷类化合物的发现及其抗炎机制的网络药理学与实验验证

　　本研究从顶花板凳果(Pachysandra terminalis)中分离鉴定出37种化合物，其中13种通过核磁共振(NMR)确证结构。运用网络药理学筛选出22种活性成分，发现槲皮素(quercetin)、染料木素(genistein)等关键成分可能通过靶向PPARG、IL-6等蛋白调控TNF和IL-17信号通路发挥抗炎作用。体外实验证实高剂量乙酯提取物(EC)及香叶木素(diosmetin)能显著抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症。该研究整合LC-MS、网络药理学和细胞实验，为开发新型抗炎药物提供了科学依据。

　　

炎症反应是机体防御的重要机制，但过度炎症会导致多种疾病。传统中药含有丰富的活性成分，但其作用机制往往不明。顶花板凳果(Pachysandra terminalis Sieb. et Zucc.)作为传统药用植物，其抗炎活性成分及机制尚待系统研究。

研究人员采用UPLC-Q-Orbitrap高分辨质谱(HRMS)从顶花板凳果乙酯提取物(EC)中鉴定出37种化合物，包括13种通过核磁共振(NMR)确认结构的新孕甾烷类化合物。运用网络药理学筛选出22个活性成分，发现槲皮素(quercetin)、染料木素(genistein)和山奈酚(kaempferol)等关键化合物可能通过靶向过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARG)、白细胞介素-6(IL-6)等关键蛋白，调控肿瘤坏死因子(TNF)和白细胞介素-17(IL-17)信号通路发挥抗炎作用。

体外实验显示，高剂量EC(200 μg/mL)及香叶木素(diosmetin)能显著抑制脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7的炎症反应，表现为促炎因子水平显著降低。该研究创新性地整合液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)、网络药理学和细胞实验，系统阐明了顶花板凳果的抗炎物质基础和作用机制。

主要技术方法包括：1)采用UPLC-Q-Orbitrap HRMS对植物提取物进行成分分析；2)通过柱层析和制备型高效液相色谱分离纯化化合物；3)运用核磁共振(NMR)和质谱(MS)进行结构鉴定；4)基于网络药理学预测活性成分-靶点-通路网络；5)采用LPS诱导的RAW 264.7细胞模型验证抗炎活性。

研究结果：

1. 1.

   化合物鉴定：从EC中鉴定出37个化合物，包括3个新孕甾烷类化合物和10个已知化合物。

2. 2.

   网络药理学分析：筛选出22个活性成分，预测其通过调节PPARG、IL-6等靶点干预TNF和IL-17信号通路。

3. 3.

   体外验证：EC和diosmetin显著抑制NO、IL-6和TNF-α的产生，证实其抗炎作用。

结论与讨论：

该研究首次系统阐明了顶花板凳果的抗炎物质基础和作用机制，为开发新型抗炎药物提供了候选分子和理论依据。特别值得注意的是，发现的孕甾烷类化合物结构新颖，其抗炎机制涉及多靶点、多通路调控，体现了中药"多成分-多靶点-多通路"的作用特点。研究结果发表在《Natural Product Research》上，为传统药用植物的现代化研究提供了范例。