综述：利什曼病分子诊断的研究进展与未来展望

　　（编辑推荐）本综述系统阐述了利什曼病（Leishmaniasis）的分子诊断技术进展，重点分析了基于PCR（聚合酶链式反应）和动基体DNA（kDNA）检测的高灵敏度方法，强调标准化DNA提取流程对提升诊断特异性的重要性，并指出分子检测在HIV合并感染患者治疗决策中的临床价值。

　　

Abstract

利什曼病作为被忽视的热带病，其临床分型包括皮肤型、黏膜皮肤型和内脏型。病原体Leishmania寄生虫通过白蛉媒介传播，传统镜检虽是金标准，但分子诊断凭借超高灵敏度（可检测10^-3 pg寄生虫DNA）已成为研究热点。

技术进展

• 靶向kDNA的实时荧光定量PCR（qPCR）灵敏度达98.7%，可区分₂₀种利什曼原虫亚型

• 多重PCR同步检测HIV共感染患者的寄生虫载量，为抗反转录病毒治疗时机提供依据

• 纳米孔测序技术实现6小时内完成虫种鉴定

临床价值

在HIV合并感染案例中，分子检测能早于血清学方法14天发现复发感染。定量数据表明，每毫升血液中>10⁴个寄生虫拷贝数与CD4⁺ T细胞计数<200/μL显著相关（p<0.01）。

现存挑战

不同实验室间DNA提取效率差异导致Ct值波动达±3.2循环，亟需建立ISO认证的样本处理流程。新型CRISPR-Cas12a快速检测技术正在验证阶段，有望将检测成本降至2美元/次。

未来方向

WHO建议将分子诊断纳入疫区常规筛查，重点开发冻干试剂盒以适应热带野外环境。人工智能算法正在训练中，目标是通过寄生虫载量动态预测5年复发风险。