piR-hsa-35410通过调控PFKL介导的糖酵解促进三阴性乳腺癌恶性进展的机制研究

　　本研究首次揭示piRNA（piR-hsa-35410）在三阴性乳腺癌（TNBC）中异常高表达，通过结合糖酵解关键限速酶PFKL（磷酸果糖激酶肝型）并增强其活性，显著促进肿瘤细胞克隆形成、迁移及糖酵解重编程（Warburg效应）。该发现为TNBC这一临床难治型乳腺癌提供了新型代谢干预靶点，具有重要转化医学价值。

　　

Highlight

本研究首次证实piR-35410在TNBC中通过调控PFKL介导的糖酵解通路驱动肿瘤恶性进展，为开发靶向piRNA-代谢轴的新型治疗策略提供理论依据。

Results

piR-35410在TNBC中显著高表达并增强恶性表型与糖酵解水平

piRNA测序显示TNBC组织中piR-35410表达显著升高（图1A）。RT-qPCR验证37对临床样本中该piRNA在癌组织的上调趋势（图1B）。功能实验表明，敲低piR-35410可抑制BT-549和MDA-MB-231细胞的克隆形成、迁移能力及糖酵解关键产物生成（乳酸和ATP），而过表达则呈现相反效应（图1C-E）。

机制研究揭示piR-35410直接结合PFKL调控酶活性

蛋白质组学筛选发现piR-35410特异性结合糖酵解限速酶PFKL的470-780氨基酸截短亚型（图2A）。RNA免疫共沉淀（RIP）和凝胶迁移实验（EMSA）证实两者直接互作（图2B）。值得注意的是，piR-35410通过变构调节显著提升PFK酶活性（提升约2.1倍），但不影响PFKL蛋白表达水平（图2C-D）。

PFKL在TNBC中高表达并协同促进糖酵解

临床样本分析显示PFKL在TNBC组织高表达（图3A）。体外实验证实PFKL过表达可增强糖酵解通量和肿瘤细胞侵袭能力，而敲除则逆转该效应（图3B-C）。挽救实验证明piR-35410依赖PFKL调控TNBC恶性表型（图3D）。

动物实验验证piR-35410-PFKL轴的促癌作用

裸鼠移植瘤模型显示，piR-35410过表达组肿瘤体积和重量显著增加（图4A），且¹⁸F-FDG PET-CT检测提示糖摄取增强（图4B）。免疫组化证实实验组PFK活性和Ki-67增殖指数同步升高（图4C）。

Conclusion

piR-35410作为TNBC的新型致癌因子，通过变构调节PFKL酶活性驱动糖酵解重编程和肿瘤进展，该机制的阐明为代谢靶向治疗提供了潜在干预窗口。