基于分析质量源于设计(AQbD)的新型等度反相高效液相色谱法(RP-HPLC)开发与验证：法匹拉韦(FAV)的绿色定量分析

　　为解决传统色谱方法开发效率低、环境负担重的问题，Maryana Salamah团队采用分析质量源于设计(AQbD)策略，通过D-最优实验设计优化流动相比例(X1)、缓冲液pH(X2)和色谱柱类型(X3)等关键参数，建立了法匹拉韦(FAV)的绿色RP-HPLC分析方法。该方法在Inertsil? ODS-3 C18柱上实现6.06分钟快速分离，理论塔板数(N)>13000，生态评分>75，为抗病毒药物质量控制提供了高效环保的解决方案。

　　

在药物分析领域，传统色谱方法开发常面临效率低下、资源浪费等问题。法匹拉韦(FAV)作为广谱抗病毒药物，其质量控制需要兼顾高效性与环保性。现有文献报道的RP-HPLC方法多采用试错法开发，不仅耗时耗材，且难以系统评估各参数间的交互影响。更关键的是，这些方法往往忽视绿色分析化学(GAC)原则，使用大量有机溶剂，不符合可持续发展理念。

针对这些挑战，Maryana Salamah等研究者创新性地将分析质量源于设计(AQbD)理念应用于FAV分析方法开发。这项发表在《European Journal of Pharmaceutical Sciences》的研究，通过系统化的质量风险管理与实验设计，成功建立了兼具高灵敏度与绿色环保特性的新型色谱方法。

研究团队运用三大关键技术：1) 基于鱼骨图与失效模式分析(FMEA)的风险评估体系，识别出溶剂比例、缓冲液pH和色谱柱类型为关键变量；2) 采用D-最优实验设计优化21组实验条件，通过蒙特卡洛模拟确定方法可操作设计区域(MODR)；3) 依据USP和ICH Q2(R1)指南完成方法验证，并结合分析生态评分(Eco-Scale)评估环境友好性。

在方法开发部分，研究者通过系统的风险评估锁定三个关键参数：乙腈比例(10-30%)、缓冲液pH(2.6-3.6)和色谱柱类型（Kinetex? EVO/Symmetry?/Inertsil? ODS-3）。实验数据表明，乙腈比例(X1)对峰面积(Y1)和理论塔板数(Y4)具有显著正向影响，每增加10%可使峰面积提升168.97 mAU*s；而Inertsil? ODS-3柱(X3)因其450 m²/g的高比表面积，能产生最优的分离效率(N>13000)。

方法验证结果显示，优化后的色谱条件（18:82乙腈-磷酸氢二钠缓冲液，pH 3.1）在6.06分钟内完成分析，系统适用性参数全面优于USP标准：理论塔板数13485±64，拖尾因子0.89±0.01，日内精密度RSD%<0.2%。线性范围1.25-120 μg/mL(R²=0.9999)，检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别达0.38 μg/mL和1.14 μg/mL，较文献报道方法灵敏度提升3倍。

在绿色评价方面，该方法仅使用18%乙腈，远低于常规HPLC方法30-50%的有机相比例，获得80分的生态评分（满分100），属于"优秀"绿色分析方法。实际应用于自制片剂检测时，回收率达97.98±1.42%，且辅料无干扰，证明其良好的专属性。

这项研究的创新价值体现在三个方面：首先，首次将AQbD理念系统应用于FAV分析方法开发，通过MODR空间量化了方法稳健性；其次，建立的D-最优设计模型可推广至其他核苷类似物的分析优化；最重要的是，该方法将分析时间缩短30%的同时，有机溶剂用量减少40%，为实施绿色分析化学提供了实践范本。正如作者指出，这种"质量源于设计"的策略可替代传统试错法，在保证数据可靠性的前提下显著提升分析效率并降低环境负荷，对推动制药行业可持续发展具有示范意义。