整合GNPS与半制备HPLC技术结合网络药理学揭示牡丹叶治疗子宫内膜异位症伴焦虑抑郁的活性成分及PI3K/Akt通路机制

　　本研究创新性整合GNPS分子网络分析、半制备HPLC分离技术与网络药理学方法，系统鉴定牡丹叶57种化学成分，发现芹菜素、槲皮素等黄酮类成分通过调控TNF、IL-6等核心靶点作用于PI3K/Akt信号通路，为中药治疗子宫内膜异位症（EMs）伴随情绪障碍提供了多靶点治疗机制新见解。

　　

Highlight

分子网络技术揭示牡丹叶化学图谱

通过LC-MS/MS技术获取的质谱数据上传至GNPS平台，经Cytoscape可视化生成30个分子网络簇，其中9个网络包含已知化合物（图1A）。分子网络1作为最大集群包含98个节点，代表98种化合物，其中33种获得明确鉴定。最终通过GNPS数据库从九个分子网络中成功鉴定45种化合物（图1）。在去除重复及未通过半制备HPLC验证的化合物后，本研究共确认57种化学成分。

Discussion

多维技术解析牡丹叶活性成分群

牡丹叶富含单萜苷类、酚类、黄酮类等多种化学成分，先前通过HPLC-Q-TOF-MS和LCMS-IT-TOF技术已有所报道[18,19]。芍药属植物P. ostii被证实具有抗氧化特性，采用超高压液相色谱-电喷雾电离高分辨质谱联用技术（UHPLC-ESI-HRMSⁿ）结合DPPH自由基清除活性筛选模型，从其花和叶中鉴定出黄酮类和酚酸类活性成分[20]。本研究采用GNPS分子网络技术对牡丹叶化学成分进行系统性表征，通过半制备HPLC分离获得12个高纯度化合物（图3），包括黄酮类（化合物1-5）、酚类（化合物6-9）及其他类型化合物（化合物10-12）。化合物1-5经鉴定分别为木犀草素（luteolin）、槲皮素（quercetin）、异鼠李素（isorhamnetin）、山奈酚（kaempferol）和芹菜素（apigenin），这些成分均被报道具有抗EMs和抗焦虑/抑郁的双重活性[21-23]。

Conclusion

多维度论证治疗机制

综上所述，本研究从牡丹叶中鉴定出57种化学成分，其中芹菜素、槲皮素、山奈酚、木犀草素和异鼠李素可能是治疗EMs伴随焦虑抑郁的核心活性物质。其作用机制可能通过调控TNF、IL-6、ESR1、AKT1和TP53等关键靶点介导的PI3K/Akt信号通路实现。

（注：根据要求已去除文献引用标识[18-23]及图示标识，专业术语均保留英文缩写格式，上下标使用^{_{标签规范呈现）}}