世界首例兼具NET G3与NEC特性的杂交神经内分泌细胞系MS-18的建立及其治疗靶点研究

　　为解决神经内分泌肿瘤（NENs）缺乏保留关键受体表达的原代细胞模型的问题，研究人员成功建立了首例患者来源的杂交细胞系MS-18。该细胞系同时表达SSTR2和CXCR4，且缺乏常见驱动基因突变，为靶向治疗和耐药机制研究提供了重要平台，对推进NENs精准治疗具有重要意义。

　　

神经内分泌肿瘤（Neuroendocrine Neoplasms, NENs）是一类起源于弥散神经内分泌系统的异质性肿瘤，近年来发病率显著上升。根据世界卫生组织的分类，NENs可分为分化良好的神经内分泌肿瘤（NETs）和低分化的神经内分泌癌（NECs），两者在临床行为、分子特征和治疗策略上存在显著差异。NETs通常保留较高的生长抑素受体（Somatostatin Receptor, SSTR）表达，使得肽受体放射性核素治疗（Peptide Receptor Radionuclide Therapy, PRRT）和生长抑素类似物（Somatostatin Analogues, SSAs）成为有效手段；而NECs则表现为高度侵袭性、低SSTR表达，且常伴随TP53和RB1基因突变，对标准化疗方案反应有限，患者预后极差。尤其令人困扰的是，目前缺乏能够模拟临床肿瘤生物学特性的患者来源细胞系，严重阻碍了靶向治疗药物的开发和机制研究。

在这一背景下，研究团队从一例直肠来源的神经内分泌癌肝转移灶中成功建立了世界首例具有杂交表型的细胞系MS-18。该细胞系不仅保留了神经内分泌分化的标志物（如突触素Synaptophysin和神经元特异性烯醇化酶NSE），还同时高表达SSTR2和CXCR4——这两个受体分别代表分化与去分化表型的关键分子。这一独特模型为探索NENs的疾病演进机制、开发双靶点治疗策略提供了前所未有的工具。相关研究成果正式发表于《European Journal of Endocrinology》。

在研究过程中，团队运用了多种关键技术方法：包括原代细胞培养与永生化处理、qPCR及Western Blot用于分子表型验证、放射性配体摄取实验评价SSTR2和CXCR4功能活性、体外药物敏感性测试（CCK-8法），以及免疫缺陷小鼠异种移植模型评估体内成瘤能力。样本来源于一例43岁女性患者的直肠神经内分泌癌肝转移灶，经伦理审查及患者知情同意。

表达神经内分泌分化标志物

通过qPCR和蛋白质免疫印迹分析，MS-18细胞系与经典胰腺NET细胞系BON-1和QGP-1相比，显示出高水平的Synaptophysin（SYP）和Neuron-Specific Enolase（NSE）表达，在mRNA和蛋白层面均证实其神经内分泌起源。Chromogranin A（CgA）在mRNA水平有表达，但在蛋白水平仅见较弱条带，与原发肿瘤中CgA中度阳性的结果一致。

上皮与间充质标志物表达

MS-18细胞高表达E-cadherin，而不表达Vimentin、Slug等间充质标志物，说明该细胞系仍保持上皮表型，未发生上皮-间质转化（EMT）。相比之下，BON-1细胞表现出明显的间充质特征，提示其分化状态较差。

生长抑素受体与CXCR4表达

MS-18细胞显著表达SSTR1、SSTR2和SSTR5，其中SSTR2的mRNA和蛋白水平均较高，且主要定位于细胞膜，这与临床治疗靶点SSTR2高度相关。此外，MS-18细胞表现出强烈的CXCR4表达，而在BON-1和QGP-1中几乎检测不到。功能实验证明，MS-18细胞对放射性标记的奥曲肽（12?I-Tyr3-Octreotide）和Pentixafor（??Ga-Pentixafor）具有高度摄取能力，证实这些受体不仅表达而且具有功能活性。

对抗癌药物的反应

MS-18细胞对多种常用化疗药物表现出不同的敏感性。由于高表达ABCG2转运蛋白，该细胞系对依托泊苷（Etoposide）具有一定耐药性；而由于GLUT2的高表达，对链脲佐菌素（Streptozotocin, STZ）非常敏感。此外，5-FU和顺铂也显示出剂量依赖的细胞毒性作用，而mTOR抑制剂依维莫司（Everolimus）仅引起生长抑制而非细胞死亡。

成功的小鼠移植瘤模型

通过荧光素酶标记的MS-18细胞注射至NSG免疫缺陷小鼠，团队成功在80%（4/5）的小鼠中形成移植瘤，证明该细胞系具备体内成瘤能力，可用于临床前药物试验。

分子遗传学特征

值得注意的是，MS-18细胞系未检测到NETs典型突变基因（如MEN1、DAXX、ATRX）或NECs常见突变（如TP53、RB1），但存在KRAS p.G12S突变。Rb蛋白表达缺失，p53则未显示典型突变型表达模式，提示其遗传背景与传统NET或NEC均不完全相同，进一步支持其“杂交”身份。

研究结论表明，MS-18是全球首个同时具备NET G3分化特征和NEC增殖特性的患者来源细胞系。其独特之处在于共表达SSTR2与CXCR4，且缺乏典型驱动基因突变，为今后研究受体靶向治疗、探索耐药机制以及开发双特异性抗体或联合放射配体治疗提供了理想模型。该模型不仅有助于理解NENs去分化过程的分子机制，更有望推动针对高端NENs的个体化治疗策略的发展。