鳄嘴花提取物通过多靶点调控细胞死亡程序抑制三阴性乳腺癌的机制研究

　　本综述系统探讨了鳄嘴花提取物（CnE）通过调控ATP2A3、PLA2G4A、ITPK1等关键靶点，诱导三阴性乳腺癌（TNBC）细胞发生凋亡、铁死亡和坏死性凋亡的多重死亡机制，并揭示其通过免疫微环境调节增强抗肿瘤效应的新策略，为TNBC靶向治疗提供重要理论依据。

　　

Abstract

本研究旨在探究鳄嘴花（Clinacanthus nutans）提取物（CnE）对三阴性乳腺癌（TNBC）的作用机制。通过体外实验发现，CnE以浓度依赖性方式抑制MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞增殖，半数抑制浓度（IC₅₀）分别为420 ± 35 μg/mL和380 ± 28 μg/mL，最高抑制率达68.5%（800 μg/mL，p < 0.001）。体内实验通过建立TNBC皮下移植瘤模型，发现CnE治疗组肿瘤体积显著小于生理盐水组，第28天抑瘤率为28.66%（P < 0.05）。组织病理学分析显示CnE促进肿瘤坏死和凋亡（P < 0.001）。

Methods

采用定量蛋白组学技术对肿瘤组织进行分析，共鉴定4,908种蛋白质，其中80种上调、7种下调。生物信息学分析表明差异蛋白涉及细胞外基质、脂肪酸代谢、细胞凋亡、铁死亡、免疫应答等多个生物学过程。免疫组化验证发现CnE组ATP2A3（1.3倍，p < 0.05）、PLA2G4A（1.6倍，p < 0.05）和ITPK1（3.2倍，p < 0.01）表达显著升高。

Results

CnE抑制TNBC细胞活力

CCK-8实验表明CnE处理显著降低MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞存活率，800 μg/mL浓度效果最显著（图1）。

CnE抑制小鼠移植瘤生长

CnE治疗组肿瘤体积（546.1 ± 29.09 mm3）和重量（0.638 ± 0.034 g）均显著低于对照组（702.63 ± 45.21 mm3，0.737 ± 0.047 g），且小鼠体重下降提示代谢加速（图2）。

蛋白组学与生物信息学分析

差异表达蛋白主要富集于不饱和脂肪酸代谢（如亚油酸代谢、花生四烯酸代谢）、钙信号通路和免疫细胞毒性等通路（图3-4）。GSEA分析显示CnE上调黏着斑、NK细胞介导的细胞毒性等基因集，下调氨基酸tRNA合成、碱基切除修复等通路（图4）。

关键蛋白功能验证

ATP2A3通过调节钙稳态诱导凋亡；PLA2G4A促进花生四烯酸释放触发铁死亡；ITPK1通过调控肌醇磷酸代谢介导坏死性凋亡（图5,7）。泛癌分析显示这些蛋白在肾癌、肝癌等多种肿瘤中具有良好预后价值（图6）。

组织病理学证据

HE染色显示CnE组肿瘤细胞核异型性减小、坏死区域增加；TUNEL实验证实凋亡水平显著升高（P < 0.001）；免疫组化验证ATP2A3、PLA2G4A和ITPK1蛋白表达上调（图7）。

Discussion

CnE通过多途径协同抑制TNBC：

1. 1.

   凋亡途径：激活ATP2A3-Ca²⁺信号轴

2. 2.

   铁死亡途径：通过XDH-ROS和PLA2G4A-AA通路促进脂质过氧化

3. 3.

   坏死性凋亡：ITPK1-IPMK-MLKL信号级联放大细胞死亡

   同时通过诱导MRC1等免疫相关蛋白增强肿瘤微环境免疫监视功能（图8）。

Conclusion

CnE通过调控ATP2A3/PLA2G4A/ITPK1等多靶点，诱导TNBC细胞发生多种程序性死亡，并增强抗肿瘤免疫应答，为开发TNBC中药靶向治疗提供新思路。