新型DNA适体L33的筛选鉴定及其在结直肠癌干细胞识别与转移预测中的应用

　　本文通过消减SELEX技术筛选出靶向结直肠癌干细胞（CRC-CSC）的特异性DNA适体L33，其具有高亲和力（Kd 16.6±2.1 nM）和温度稳定性，可有效富集干细胞样循环肿瘤细胞（CTC），为结直肠癌转移预测和靶向治疗提供新型分子探针。

　　

Highlight

通过消减细胞-SELEX技术（subtractive cell-SELEX），以高干性结直肠癌细胞HCT116为靶细胞、低干性CL187细胞为对照，成功筛选出两个特异性适体。其中截短型适体L33对高干性CRC细胞展现出优异亲和力（解离常数K_d为16.6±2.1 nM）和温度稳定性。

Selection of DNA aptamers against HCT116 cells by cell-SELEX

癌症干细胞（CSCs）是支持肿瘤生长和转移的关键群体，而结直肠癌中具有干性特征的肿瘤细胞更易在淋巴和血管系统中传播存活。本研究采用人结直肠癌细胞系HCT116（已知具有强干性特征）作为靶细胞，CL187细胞（低干性）作为消减细胞，通过多轮正负筛选富集特异性结合靶细胞的ssDNA库。经过高通量测序和结合分析，最终获得两个候选适体L33和L4。

Conclusions

通过消减cell-SELEX技术成功获得两个特异性识别靶细胞HCT116的适体。截短型适体L33表现出更高亲和力（K_d为16.6±2.1 nM）和对高干性CRC细胞的优异特异性。通过基于L33的细胞分选获得两个细胞亚群（L33^high和L33^low），并验证L33阳性群体具有更高的干性标志物表达、肿瘤球形成能力、化疗药物耐受性、迁移侵袭能力和体内成瘤性。进一步将L33作为干细胞性CTC捕获探针，发现在转移性CRC患者外周血中L33阳性CTC检出率更高，表明L33可用于预测转移风险。