靶向脂解刺激脂蛋白受体（LSR）的抗体药物偶联物治疗三阴性乳腺癌（TNBC）的创新策略与临床前评估

　　本综述系统阐述了靶向脂解刺激脂蛋白受体（LSR）的抗体药物偶联物（ADC）在治疗三阴性乳腺癌（TNBC）中的突破性进展。研究证实LSR在TNBC中高表达（>63%），并成功开发出新型抗LSR单抗（mAb）及其与美坦新（DM1）偶联的ADC，在体外及体内（两种异种移植小鼠模型）均展现出显著抗肿瘤活性（85%肿瘤负荷减少）且无系统性毒性，为TNBC靶向治疗提供了新靶点和新策略。

　　

引言

三阴性乳腺癌（TNBC）作为最具侵袭性的乳腺癌亚型（ER^-/PR^-/HER2^-），其特征是快速增殖、高转移率和频繁复发。由于缺乏有效的细胞表面受体，其靶向治疗（如抗体药物偶联物ADCs）的发展一直受限。近期研究发现，脂解刺激脂蛋白受体（LSR）在乳腺癌患者中过度表达。本研究旨在开发一种靶向LSR的单克隆抗体（mAb）及其ADC，用于TNBC治疗。

材料与方法

研究遵循机构动物护理与使用委员会（IACUC）批准的方案进行。使用了人源TNBC细胞系（MDA-MB-231、MDA-MB-468）和小鼠源细胞系（4T1），培养于含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素的培养基中。通过杂交瘤技术开发了靶向LSR细胞外结构域（Met1-Asp259）的鼠源mAb，并将其可变区与人IgG1的Fc区融合，构建嵌合抗体。利用Expi293F细胞通过瞬转表达系统生产抗体，并通过亲和色谱纯化。ADC通过磺基-SMCC linker将LSR mAb与细胞毒剂美坦新（DM1）偶联构建。采用高效液相色谱（HPLC）分析ADC纯度和药物抗体比（DAR），质谱定量DAR。体外细胞毒性通过MTT法测定。流式细胞术评估mAb表面结合，活细胞共聚焦显微镜观察内化过程。体内成像系统（IVIS）分析小鼠模型中ADC的靶向性和分布。在MDA-MB-231和4T1异种移植模型中评估抗肿瘤功效，通过卡尺测量肿瘤体积和IVIS成像监测。免疫组织化学（IHC）染色分析患者组织芯片（TMA）和正常器官中LSR表达，Western blotting验证细胞系中LSR蛋白水平。苏木精-伊红（H&E）染色评估组织病理学变化。数据以均值±标准误（SEM）表示，采用t检验、ANOVA和Dunnett事后检验进行统计分析。

结果

LSR在TNBC中的表达

通过IHC染色TNBC患者组织芯片（TMA, n=110），发现32.7%样本呈高LSR表达，29.9%为中度表达，总计62.6%的TNBC病例显示LSR上调。TCGA转录组分析显示，TNBC中LSR mRNA水平显著高于正常乳腺组织。Western blotting在MDA-MB-231、MDA-MB-468和4T1细胞系中均检测到高LSR蛋白表达，证实其作为治疗靶点的潜力。

抗LSR mAb的开发、工程化与生产

开发出靶向LSR细胞外结构域的特异性mAb（克隆3C4A7），并将其工程化为嵌合形式（人IgG1 Fc）。在9天培养中，抗体产量达41.6 mg/L，通过蛋白A色谱纯化获得高纯度产品。

LSR mAb的TNBC靶向性与跨物种反应性

流式细胞术显示，mAb与MDA-MB-468、MDA-MB-231和4T1细胞的结合率分别为100%、95.6%和73.3%。共聚焦显微镜证实mAb在MDA-MB-468细胞中内化。体内IVIS成像显示，Cy5.5标记的mAb在MDA-MB-231移植瘤中特异性聚集，而在主要器官（脑、心、肺、脾、肝、肾）无显著信号，表明其良好的肿瘤靶向性。

LSR靶向ADC的体外细胞毒性

ADC的DAR为3.91。体外细胞毒性试验显示，游离DM1对4T1、MDA-MB-231和MDA-MB-468的IC₅₀分别为6.6 nM、10.7 nM和25.5 nM，而ADC的IC₅₀分别为46.0 nM、43.1 nM和35.5 nM，证实ADC能有效杀死TNBC细胞。

ADC在MDA-MB-231异种移植模型中的抗TNBC功效

在NSG小鼠模型中，24 mg/kg剂量的ADC使肿瘤负荷减少85%，且疗效呈剂量依赖性。IVIS成像和H&E染色显示ADC显著抑制肿瘤生长和细胞增殖，IHC染色证实Ki67表达下调。

ADC在4T1异种移植模型中的抗TNBC功效

在免疫 competent BALB/cJ小鼠中，24 mg/kg ADC导致肿瘤缩小，且未引起体重下降。IVIS成像显示治疗组荧光信号微弱，H&E染色显示肿瘤细胞广泛死亡，IHC检测到cleaved caspase 3上调和Ki67下调，表明ADC诱导凋亡并抑制增殖。共聚焦显微镜显示抗LSR mAb减少MDA-MB-231细胞中的脂滴积累。

毒性评估

ADC治疗未导致小鼠体重减轻或主要器官（心、脑、肺、肝、肾、脾）的病理损伤。IHC染色33种正常人体组织显示，mAb仅与肝和胰腺有微弱结合，表明其良好的安全性谱。

讨论

LSR作为TNBC的新靶点，其过度表达与不良预后相关。本研究开发的抗LSR mAb和ADC在临床前模型中显示出显著疗效和低毒性。ADC的疗效可能源于DM1的细胞毒作用和mAb潜在的免疫调节效应（如抑制LSR介导的CD8⁺ T细胞抑制）。未来方向包括优化剂量、开发双载荷ADC（如联合化疗与免疫调节剂）、双靶向策略（如LSR与Trop-2或CD276联用），以及推进到人源化模型或类器官平台验证临床转化潜力。LSR在多种癌症（胃癌、卵巢癌、子宫内膜癌）中的高表达提示其广谱治疗价值，而抗LSR mAb也将成为研究LSR在肿瘤发生、代谢重编程和免疫调控中功能的有力工具。