健康山羊经气管冲洗液采集与分析：建立下呼吸道细胞学与微生物学健康基准

　　本综述系统介绍了健康山羊经气管冲洗（TTW）技术的标准化操作流程及其细胞学（TNCC、巨噬细胞为主）、微生物学（Bibersteinia trehalosi等）特征，为临床诊断山羊支气管肺炎提供关键参考指标（TTWF），并强调细胞学与培养结果需结合临床表现综合解读。

　　

背景

呼吸道疾病是北美畜牧业中最常见且成本高昂的疾病之一，严重影响饲料效率、死亡率和治疗成本。经气管冲洗（TTW）作为诊断伴侣动物、牛和马呼吸道疾病的常用技术，在健康山羊中的应用尚未有系统描述。当前诊断方法如鼻拭子易受污染，影像学检查存在假阳性和假阴性风险，而支气管肺泡灌洗（BAL）虽能提供下呼吸道细胞学信息，但受节段性疾病和上呼吸道菌群污染限制。TTW虽非完美，但在下呼吸道感染病原采样中常优于BAL。

假设与目标

本研究旨在描述健康山羊TTW液（TTWF）采集技术，并分析其细胞学组成和细菌种群，为临床提供健康基准数据。

动物与方法

研究纳入33头健康大学自有波尔母山羊，年龄6个月至6岁。所有山羊经体格检查、肺部听诊、胸部超声评分（0-5分）和全血细胞计数（CBC）筛选，排除超声评分≥1、体况评分≤2/5、中性粒细胞异常或肺蠕虫阳性个体。TTW操作使用Mila大动物经气管冲洗套件，在镇静（咪达唑仑和布托啡诺）状态下经皮穿刺气管注入0.9%无菌盐水（0.4 mL/kg），立即抽吸收集TTWF。样本分装至无菌管（微生物培养）和EDTA管（细胞学分析），4°C冷藏并在4小时内处理。细胞学分析包括总核细胞计数（TNCC）和400细胞分类计数，微生物培养需氧和厌氧条件下进行，细菌鉴定采用MALDI-TOF MS和生化试验。

结果

TTWF平均回收体积为10.8%。29份有效样本中，巨噬细胞为主要细胞群（40%–92%），其次为小淋巴细胞（3%–39%）和中性粒细胞（2%–32%），嗜酸性粒细胞和肥大细胞罕见。TNCC中位数1806 cells/μL（范围359–8827 cells/μL）。常见细胞学发现包括纤毛柱状呼吸上皮细胞、双核巨噬细胞或多核巨细胞（MNGC），以及真菌孢子或环境污染物。微生物培养显示62.1%（18/29）样本为混合细菌生长，纯培养中最常见细菌为Bibersteinia trehalosi（17.2%），其次为肠杆菌属、梭杆菌属、曼海姆菌属等。细胞学细菌存在与培养结果无显著关联（p=0.63）。排除的3份样本因细胞内细菌或真菌菌丝证据，虽临床健康但提示潜在亚临床感染。

术后观察

所有山羊术后出现中度局部水肿，5例发生皮下脓肿，但均未影响呼吸或吞咽，4周内自行缓解。较小山羊操作难度较高，需非甾体抗炎药处理。

讨论

TTW细胞学结果与马和牛报道一致，单核细胞为主且中性粒细胞比例可变（参考区间上限28%）。环境污染物吸入解释常见双核巨噬细胞和MNGC。细菌培养显示下呼吸道非无菌特性，常见病原如Bibersteinia trehalosi和Rhodococcus equi（可能来自环境）在健康个体中存在，强调培养结果需结合临床解读。细胞学与培养不一致性可能源于细菌载量低或处理延迟。排除样本提示细胞学证据可能早于临床表现，需进一步研究真菌角色和炎症关系。

技术评价

TTW术镇静方案平衡站立配合与咳嗽控制，盐水灌流量（0.4 mL/kg）适应山羊较小气管直径。10号导引器适用于大多数个体，但≤20 kg山羊建议改用小规格导管。1 cm皮肤切口和2 mL利多卡因提供足够操作空间，但可优化减小以减少并发症。

局限性

血液污染普遍但轻微，未显著影响细胞学计数。细菌培养未能检测非可培养病原（如支原体），PCR可增强病原筛查。样本量小（29例）和单一波尔羊群限制参考区间（RI）外推，需多中心验证。环境、年龄、病史等因素可能影响结果，强调临床语境解读必要性。

结论

TTW是山羊下呼吸道疾病诊断的实用微创技术，可现场实施。健康山羊TTWF以巨噬细胞为主，细菌种群包含多种潜在病原。细胞学不能预测细菌生长，诊断需综合培养、细胞学和临床表现。研究为山羊呼吸道疾病管理提供基础，未来需探索微生物组动态和诊断优化。