以毒抑炎：石鱼毒液抑制LPS诱导的人PBMCs中Th1细胞因子表达与分泌的免疫调节机制研究

　　本研究针对炎症性疾病免疫调节治疗的迫切需求，探索了疣状鲉（Synanceia verrucosa）和骇人鲉（Synanceia horrida）毒液的免疫抑制特性。通过RT-qPCR、CBA和ELISA等技术，发现两种毒液显著抑制LPS刺激的人外周血单核细胞（PBMCs）中TNF、IFN-γ、IL-6等Th1细胞因子的表达与分泌，且冷冻和冻干处理可保留活性。该研究为开发新型抗炎药物提供了天然分子资源，具有重要转化价值。

　　

动物毒液长期以来被视为致命威胁，但其复杂成分中潜藏着治疗疾病的宝贵分子资源。在免疫调节领域，炎症性疾病如自身免疫病和慢性炎症亟待更高效、靶向性强的治疗策略。传统抗炎药物存在副作用大或特异性不足等问题，而动物毒液中的活性成分因其高效性和特异性引起学界关注。石鱼（Stonefish）作为海洋中毒性最强的鱼类之一，其毒液成分复杂且作用机制不明，但前期研究表明其同源物种毒液中存在免疫调节蛋白（如巴西蟾鱼中的natterins），这为探索石鱼毒液的免疫抑制潜力提供了线索。在此背景下，澳大利亚詹姆斯库克大学热带健康与医学研究所的Silvia Luiza Saggiomo团队在《Toxicon》发表了针对疣状鲉（Synanceia verrucosa, SvV）和骇人鲉（Synanceia horrida, ShV）毒液免疫调节作用的系统性研究。

研究采用多技术联用策略：通过密度梯度离心从人外周血中分离PBMCs（样本来源包括本地健康捐赠者和澳大利亚红十字血液服务库）；利用RT-qPCR检测细胞因子mRNA表达；使用CBA和ELISA分析蛋白分泌水平；通过尺寸排阻色谱（SEC）和反相高效液相色谱（RP-HPLC）进行毒液组分分离；并采用细胞毒性试验（CellTox Green法）评估毒液安全性。

3.1. 石鱼毒液的细胞毒性

研究发现SvV在80 μg/mL浓度时对PBMCs产生显著细胞毒性，而ShV在100 μg/mL内无毒性作用，因此后续实验将浓度控制在20 μg/mL以内，确保免疫调节效应非由细胞死亡引起。

3.2. 新鲜毒液对细胞因子分泌的免疫抑制活性评估

CBA检测显示，SvV在LPS刺激的PBMCs中剂量依赖性地抑制Th1相关细胞因子（TNF、IFN-γ、IL-12、IL-6）和趋化因子MCP-1，其中TNF抑制率高达83.2%（20 μg/mL），但对P/I刺激的细胞影响较弱。这表明石鱼毒液对TLR4通路介导的炎症具有选择性抑制。

3.3. 毒液存储与处理方式对免疫抑制活性的影响

ELISA分析表明：新鲜、冷冻（-80°C）和冻干处理的SvV均保留抑制TNF分泌的能力（20 μg/mL浓度下抑制率95%-100%），但RP-HPLC处理则完全丧失活性，提示活性成分可能为对有机溶剂敏感的蛋白质。长期冷冻存储（12-15个月）后，两种毒液的抑制活性反而增强，推测因毒性成分降解而活性成分相对富集。

3.4. 毒液对细胞因子表达的调控作用

RT-qPCR结果显示，SvV显著下调LPS刺激的PBMCs中TNF、IFN-γ和IL-10的mRNA表达（IFN-γ抑制率达91.6%），而ShV仅抑制TNF和IL-10。两者对P/I刺激的细胞均无显著影响，进一步证实其对TLR4通路的特异性。

3.5. 分级毒液组分的免疫抑制活性

SEC分离发现：SvV的组分1（含13,960 Da蛋白）和组分5（含12,365 Da蛋白）以及ShV的组分1（含14,007 Da蛋白）和组分4（含12,068 Da蛋白）均表现出强TNF抑制活性（抑制率85%-98%）。固相萃取（SPE）小分子组分也具抑制效果，提示小分子物质（如GABA和去甲肾上腺素）可能参与免疫调节。

研究结论表明，石鱼毒液通过特异性抑制TLR4/NF-κB通路关键细胞因子（尤其是Th1型），展现靶向免疫调节潜力。其活性成分在冷冻状态下稳定存在，且可通过色谱技术分离纯化。讨论部分强调，该发现不仅为理解石鱼毒液生物学功能提供新视角，更为开发类风湿关节炎、多发性硬化等Th1相关疾病的天然抑制剂奠定基础。分子量相近的蛋白在不同物种间的保守性（如SvV的13,690 Da与ShV的14,007 Da蛋白）提示其可能为同源免疫调节蛋白，值得进一步解析结构与机制。