KRAS突变通过ETV4介导PD-L1上调促进肺腺癌免疫逃逸的机制研究

　　本研究聚焦KRAS突变肺腺癌中PD-L1介导的免疫逃逸机制，通过多组学分析与功能实验，首次揭示转录因子ETV4作为KRAS-MEK-ERK通路下游关键效应分子，直接结合PD-L1启动子区域并调控其表达，为KRAS突变型肺癌的免疫治疗提供新靶点和理论依据。

　　

肺癌是全球癌症相关死亡的主要原因之一，其中肺腺癌是最常见的组织学亚型。KRAS基因突变在肺腺癌中发生率较高，与肿瘤的增殖、侵袭和不良预后密切相关。近年来，免疫检查点抑制剂（Immune Checkpoint Inhibitors, ICIs）尤其是针对程序性死亡蛋白1（PD-1）及其配体PD-L1的抗体，在多种肿瘤治疗中显示出显著疗效。然而，在KRAS突变肺腺癌患者中，免疫治疗的响应率仍不理想，其背后机制尚不完全清楚。研究表明，KRAS突变可上调PD-L1表达，帮助肿瘤细胞逃避T细胞介导的免疫监视，但KRAS如何精确调控PD-L1的表达，尤其是其中是否存在关键转录因子介导这一过程，仍是一个亟待解答的科学问题。

为解决上述问题，来自中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院病理科的研究团队开展了一项深入的研究，旨在揭示KRAS突变通过MEK-ERK信号通路调控PD-L1表达的具体分子机制，并探索其与免疫逃逸的关系。该研究最终发现转录因子ETV4是连接KRAS信号与PD-L1表达的关键桥梁，相关成果发表在《Trauma Case Reports》上。

在研究过程中，作者综合运用了临床样本分析（包括60例肺腺癌患者的组织样本）、转录组测序、生物信息学分析（如GEO数据库挖掘、WGCNA加权共表达网络分析）、分子生物学实验（包括qPCR、Western blot、荧光素酶报告基因实验、染色质免疫沉淀ChIP）、细胞功能实验（CCK-8、Transwell、划痕实验）以及体内外免疫学实验（流式细胞术、LDH细胞毒性检测、小鼠移植瘤模型）。这些方法系统地验证了KRAS-ETV4-PD-L1轴在肺腺癌免疫调控中的重要作用。

致癌性KRAS突变诱导肺腺癌中PD-L1表达

通过转录组测序和GEO数据集分析，研究人员发现KRAS突变型肺腺癌组织及细胞系（如H358、H2122）中PD-L1 mRNA和蛋白表达均显著高于KRAS野生型。免疫组化结果进一步证实了这一现象。利用KRAS敲低和RAS单链抗体抑制RAS活性后，PD-L1表达明显下降，说明KRAS突变直接驱动PD-L1上调。

ETV4是KRAS突变肺腺癌中上调PD-L1的关键转录因子

通过WGCNA分析和转录因子筛选，研究团队锁定ETV4为候选关键因子。临床样本显示，ETV4在KRAS突变肺腺癌中高表达，且与PD-L1水平呈正相关。在KRAS突变细胞系中敲低ETV4可显著降低PD-L1表达，而过表达ETV4则能逆转KRAS敲低引起的PD-L1下调，证实ETV4是KRAS调控PD-L1的核心介质。

KRAS突变通过MEK-ERK信号通路上调ETV4从而促进PD-L1表达

研究发现，抑制MEK或ERK活性可降低ETV4和PD-L1的表达，且ETV4位于MEK-ERK通路下游。KRAS通过激活MEK-ERK信号级联反应上调ETV4，进而增加PD-L1转录，形成KRAS-MEK-ERK-ETV4-PD-L1调控轴。

ETV4作为转录因子直接调控KRAS突变肺腺癌中PD-L1的表达

利用JASPAR数据库预测和荧光素酶报告实验，研究人员发现ETV4可直接结合PD-L1启动子区域的特定位点（如-1754~-1763 bp处的AACGGAATTT序列）。ChIP实验进一步验证了ETV4与该序列的直接结合，表明ETV4是以转录因子方式激活PD-L1转录。

ETV4增强KRAS突变肺腺癌的生物学特性

功能实验表明，抑制ETV4表达可降低KRAS突变肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力，并促进细胞凋亡。域缺失实验显示，ETV4的ETS结构域是其发挥促癌功能的关键。动物实验进一步证实，敲低ETV4可抑制肿瘤生长，说明ETV4在肿瘤进展中具有重要作用。

KRAS突变通过ETV4促进PD-L1介导的免疫逃逸

通过体外共培养体系和动物模型，研究发现敲低ETV4或抑制RAS活性可增强CD8⁺ T细胞对肿瘤细胞的杀伤能力，降低PD-1和PD-L1表达，并提升IFN-γ和TNF-α等效应细胞因子水平。这表明干扰ETV4可恢复T细胞功能，逆转PD-L1介导的免疫抑制。

研究结论与讨论部分强调，本研究首次系统地揭示了KRAS突变通过MEK-ERK-ETV4信号轴上调PD-L1表达、促进免疫逃逸的机制。ETV4作为 transcription factor 直接结合并激活PD-L1转录，不仅深化了对KRAS突变肿瘤免疫微环境的理解，也为临床治疗提供了新的潜在靶点。针对ETV4的干预策略（如小分子抑制剂或基因沉默技术）可能成为改善KRAS突变肺腺癌免疫治疗疗效的新途径。此外，该研究提示ETV4与PD-L1的表达水平可能作为预测免疫检查点抑制剂反应的生物标志物，具有重要的临床转化价值。未来研究可进一步探索ETV4的转录后修饰（如磷酸化、乙酰化）对其功能的影响，以及其在其他免疫细胞（如Treg、MDSC）中的作用，以更全面地揭示其在肿瘤免疫逃逸中的网络式调控功能。