CD9在正常骨髓细胞与白血病髓系原始细胞中的差异表达及其在急性髓系白血病分型和微小残留病监测中的价值

　　本期推荐：为解决急性髓系白血病（AML）分型及微小残留病（MRD）监测中缺乏可靠标志物的难题，研究人员开展CD9表达特征研究。通过流式细胞术（MFC）分析69例正常样本和58例AML患者，发现CD9在正常髓系原始细胞（GMFI: 1615）中低表达，而在PML::RARA AML中表达最高（GMFI: 6856-35903）。证实CD9可区分正常与异常髓系祖细胞，成熟B细胞可作为内参阴性对照（GMFI: 698），为AML的MRD监测提供新策略。

　　

在血液肿瘤研究领域，急性髓系白血病（AML）的诊断分型和治疗后微小残留病（MRD）监测始终是临床面临的重大挑战。虽然CD9作为四跨膜蛋白家族成员，在B淋巴母细胞白血病中已被广泛研究，但其在AML中的表达特征和临床价值仍缺乏系统评估。尤其值得注意的是，正常骨髓微环境中各类细胞成分的CD9表达基线尚未明确，导致在MRD监测中难以区分白血病细胞与再生骨髓中的正常原始细胞。这种区分至关重要，因为误判可能直接影响治疗策略选择和患者预后。

为了解决这一问题，由Afreen Jasim和Lori Soma等研究人员组成的团队开展了一项深入研究，系统分析了CD9在正常骨髓细胞组分和白血病髓系原始细胞中的表达差异。他们的研究成果发表在《American Journal of Clinical Pathology》上，为AML的精确诊断和MRD监测提供了重要依据。

研究团队采用流式细胞术（MFC）这一关键技术，对临床样本进行多参数分析。研究纳入69例正常或非髓系肿瘤患者的骨髓和外周血样本，以及58例新诊断AML患者样本，所有样本均来自City of Hope医学中心的病理学档案。通过几何平均荧光强度（GMFI）定量评估CD9表达水平，并采用荧光减一（FMO）对照实验确保检测特异性。统计分析采用对数转换后的GMFI数据进行组间比较，使用SAS 9.4软件完成。

正常细胞亚群分析

研究人员首先系统评估了正常骨髓中各细胞亚群的CD9表达模式。结果显示，CD9表达水平从低到高依次为：成熟B细胞（GMFI: 698）、正常髓系原始细胞（GMFI: 1615）、中性粒细胞（GMFI: 1818）、早幼粒细胞（GMFI: 2095）、单核细胞（GMFI: 5689），而造血干祖细胞（ hematogones）的阶段1（GMFI: 13129）和阶段2（GMFI: 14755）表达最高。特别值得注意的是，通过FMO对照实验证实，成熟B细胞和正常髓系原始细胞的CD9表达虽然微弱但确实存在，这与单纯背景噪音有所区别。

在造血干细胞（HSC）与定向髓系祖细胞（CMP）的比较中发现，HSC（CD34⁺/CD38^dim-/CD19^-）的CD9表达显著高于CMP（CD34⁺/CD38⁺/CD19^-），这一发现在所有8例可评估病例中高度一致。此外，研究还观察到4例正常髓系原始细胞CD9表达异常升高的患者，其中3例伴有病毒感染（HIV、HBV或HSV-1），提示炎症或感染状态可能影响CD9表达。

急性髓系白血病分析

在AML队列中，CD9表达显示出明显的亚型特异性差异。PML::RARA AML（急性早幼粒细胞白血病，APL）表达水平最高（GMFI范围: 6856-35903），其次为CBFB::MYH11 AML（GMFI范围: 3520-14178）和KMT2A重排AML（GMFI范围: 7852-9624）。与正常髓系原始细胞（最高GMFI为4662）相比，GMFI大于6000可视为异常表达的阈值，此标准能识别38%的AML病例，其中非APL病例占20%。

研究还发现，APL白血病细胞的CD9表达显著高于正常早幼粒细胞，支持其作为MRD监测标志物的潜力。在10例配对骨髓和外周血样本中，CD9表达水平存在差异，但未达到统计学显著性。特别有趣的是，在一例CBFB::MYH11 AML患者的治疗后监测中，常规MFC检测到0.9%的髓系原始细胞仅表现为CD9表达异常（GMFI升高），而专门MRD检测为阴性，但FISH证实存在2.5%的CBFB重排细胞，提示CD9可能具有更高的敏感度。

讨论与结论

本研究系统描绘了CD9在正常造血细胞和AML细胞中的表达图谱，确立了成熟B细胞作为内部阴性对照的可靠性。研究发现CD9在白血病髓系原始细胞中通常表达升高，尤其在APL中表现突出，为AML分型提供了新的免疫表学依据。

研究结果支持CD9作为MRD监测标志物的潜在价值，特别是在APL背景下。正常HSC与CMP之间的CD9表达差异为识别白血病干细胞提供了新思路。然而，研究人员也注意到在某些情况下需谨慎解读CD9表达，如病毒感染或炎症状态可能导致表达上调，建议同时评估其他髓系成分的表达模式以排除干扰。

该研究的局限性包括样本量较小（某些AML亚型病例数少于10）、回顾性设计以及CD9与髓系抗原不在同一检测管中等。未来需要更大规模的前瞻性研究来验证CD9在AML MRD监测中的价值，并进一步探索其在HSC与CMP区分中的生物学意义。

总之，这项研究为AML的诊断分型和MRD监测提供了重要的实验依据，证实CD9是一个有价值的免疫表型标志物。通过建立正常表达基线和异常判断标准，研究人员为临床流式细胞术数据分析提供了实用工具，最终有望改善AML患者的个体化治疗和预后评估。