微针辅助外泌体疗法重塑表皮与真皮连接处的组织学证据：单案例研究报告

　　本研究首次通过组织学证实，微针辅助外泌体（exosomes）疗法可显著改善老化皮肤的表皮与真皮连接处（DEJ）结构，包括增加表皮厚度（+52.33%）、基底角质细胞密度（+60.90%）和胶原纤维密度（+5.77%），为皮肤再生提供新策略。

　　

Abstract

Purpose

本研究旨在评估微针辅助外泌体（exosomes）疗法对老化皮肤中真皮表皮连接处（DEJ）及周围表皮结构的组织学影响。

Patients and Methods

在一项单案例研究中，一位63岁健康男性接受了一次0.3毫米微针治疗后立即局部应用外泌体制剂（E-50 Skin Booster，PrimaCure Co., Ltd., Korea）。分别在基线和治疗后八周于耳后区域采集3毫米穿刺活检样本，使用苏木精-伊红（H&E）染色，并通过高分辨率成像与人工智能辅助定量工具分析组织形态参数。

Results

组织学分析显示DEJ结构显著重塑，网嵴数量增加17.08%（p = 0.02），网嵴振幅增加7.75%（p = 0.04）。平均表皮厚度增加52.33%（p = 0.01），基底角质细胞密度上升60.90%（p = 0.01），表明再生活性增强。真皮上层胶原纤维密度提高5.77%（p = 0.05）。未见不良反应，治疗后组织无炎症或纤维化迹象。

Conclusion

微针辅助外泌体疗法在老化皮肤的表皮和真皮层面均产生显著结构改善。网嵴恢复、角质细胞增殖增强及胶原密度增加表明该联合疗法在皮肤年轻化中具有潜力。本研究结果仅适用于微针辅助局部给药，不涉及未经评估的可注射外泌体。

Introduction

传统医学美容多聚焦于真皮年轻化，如促进胶原生成和弹力蛋白再生，却常忽视表皮的调控作用。实际上，皮肤质地、光泽与色调均受表皮状态影响，而表皮的健康状况又高度依赖于真皮表皮连接处（DEJ）的结构完整性。DEJ作为表皮与真皮之间的关键界面，不仅提供机械支撑，还调节细胞信号传导与营养交换。随着年龄增长，DEJ出现显著退化，主要表现为连接处扁平化，导致分子交换表面积减少，同时IV型与VII型胶原、层粘连蛋白-332（laminin-332）及整合素（integrins）等重要结构蛋白减少，进而削弱表皮黏附、降低屏障功能并增加环境损伤易感性。

此外，表皮本身亦随年龄发生改变，包括角质细胞增殖减缓、网嵴（rete ridges）扁平化、基底细胞密度下降，导致表皮变薄和结构弱化。屏障功能受损同样常见，脂质合成减少及表皮更新减慢引发经皮水分流失增加，皮肤干燥、纹理不均及弹性下降等问题逐渐显现。因此，针对DEJ的修复成为抗衰老干预的新焦点。

在再生疗法中，外泌体作为一种新兴策略备受关注。它们作为细胞外囊泡，可高效递送生长因子、细胞因子及其他生物活性分子，促进靶向组织再生。其脂质双分子层结构能够与受体细胞直接融合，实现精准的胞内递送。外泌体制剂可来源于植物、动物或人类细胞培养物，均被报道具有皮肤支持功效。尤其当与外泌体联用时，微针可通过形成临时微通道增强外泌体渗透，从而提升表皮与真皮再生的效果。

Methods

Study Design and Biopsy Collection

本案例研究采用单受试者设计，评估微针辅助外泌体疗法对DEJ及周围结构的八周组织学影响。受试者为63岁健康男性，无皮肤病史及系统性疾病，且在研究前六个月未接受任何针剂、化学剥脱或能量设备治疗。基线时于耳后区采集3毫米穿刺活检，样本经10%中性缓冲福尔马林固定。

Treatment Protocol

治疗区域经消毒后，使用自动化微针设备（42针针头，深度0.3毫米）进行四向（垂直、水平及双对角线）处理，以均匀形成微通道。微针后立即涂抹外泌体制剂（E-50 Skin Booster），并嘱患者12小时内避免清洗或触碰该区域。

Follow-Up Biopsy Collection

治疗后八周，于相邻部位再次采集3毫米穿刺活检，处理方式同基线样本。

Histological Analysis

Tissue Processing and Staining

福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）样本切片厚度为5微米，经H&E染色后用于评估表皮、DEJ及真皮上层的形态学变化。所有图像均在×100放大倍数下采集，含标准化100微米尺度条。

Quantitative Image Analysis

采用高分辨率图像和人工智能（AI）数据分析工具定量以下参数：

1. 1.

   DEJ重建：网嵴峰值计数（个/毫米）及网嵴振幅（微米）；

2. 2.

   表皮厚度与基底角质细胞密度：沿DEJ均匀测量1000个点计算平均厚度，并统计基底角质细胞密度（细胞数/毫米²）；

3. 3.

   细胞外基质（ECM）密度：真皮上层胶原纤维面积占比（%）。

Statistical Analysis

每样本随机选取五个视野进行测量，数据以均值±标准差表示，采用配对双尾t检验，显著性阈值设为p < 0.05。

Results

组织学分析证实治疗后表皮结构增强、DEJ完整性改善及真皮上层ECM密度上升。

Dermoepidermal Junction Restoration

DEJ结构显著改善：网嵴峰值数从2681个/毫米增至3139个/毫米（+17.08%），网嵴振幅从671微米升至723微米（+7.75%），表明年龄相关性扁平化被逆转，界面更趋年轻态。

Epidermal Thickness and Basal Keratinocyte Density

平均表皮厚度从12.70微米增加至19.34微米（+52.33%），最大厚度从377.0微米提升至624.0微米（+65.52%）。基底角质细胞密度由1464.77细胞/毫米²上升至2356.84细胞/毫米²（+60.90%），提示基底层增殖活性持续增强。

Extracellular Matrix Remodeling

真皮上层胶原纤维密度从12.44%提高到13.15%（+5.77%），表明胶原断裂减少、纤维结构更紧凑，皮肤弹性可能改善。

Safety and Tolerability

研究期间未见红斑、刺激或过敏等不良反应，组织学分析亦无异常炎症或纤维化迹象。

Discussion

目前虽无DEJ评估的标准化临床分级体系，但本研究通过组织形态计量学参数（如网嵴数量、振幅、表皮厚度、基底细胞密度和胶原密度）客观反映了其结构恢复程度。结果表明，修复DEJ可显著改善表皮特性，如增厚、细胞组织性提升及屏障功能增强。

表皮厚度增加与基底角质细胞密度上升对老化皮肤具有重要意义。年龄相关的表皮变薄和细胞减少会导致皮肤脆弱、伤口愈合缓慢及屏障功能下降，临床表现为干燥、敏感和易受刺激。本疗法或可增强皮肤韧性、降低损伤敏感性并改善保湿能力。

DEJ架构的恢复尤为关键。老化常伴随DEJ扁平化及IV型/VII型胶原、层粘连蛋白-332等锚定蛋白减少，而治疗后DEJ复杂性增加、基底膜增厚及表皮-真皮黏附增强，表明外泌体可能刺激ECM重塑并强化细胞黏附机制。网嵴深化进一步改善了表皮与真皮间的相互作用，有利于营养交换与结构支持。

真皮上层ECM的变化亦值得关注，胶原密度增加和弹力纤维更有序提示成纤维细胞活化及ECM重塑，这对维持皮肤弹性和抗机械应力至关重要。

外泌体的治疗效果可能因其生物来源、分子载荷及制备工艺而异。本研究使用海洋动物来源的外泌体，其生物活性成分可能对表皮与真皮再生具有独特作用。尽管微针单独使用已可刺激胶原重塑和表皮更新，但联合外泌体或通过靶向分子信号增强效应强度与持久性。

本研究存在一定局限性：单案例设计、无对照组、无法区分微针与外泌体的独立贡献。未来研究需探索重复治疗 protocol、对比局部与注射递送方式，并在更大规模对照组中评估长期效果。

Conclusion

本研究表明，微针辅助局部外泌体疗法可通过重塑DEJ、增厚表皮及提高胶原密度，实现老化皮肤的结构性年轻化。若经更大规模对照试验验证，该策略有望成为抗衰老治疗的重要选择，尤其适用于微创美容、伤口愈合及屏障修复。但外泌体的商业化生产、标准化及成本效益仍需进一步探讨。值得注意的是，本研究结果仅支持微针辅助局部给药方式，不涉及可注射外泌体的应用。