FADD激活在肝细胞癌中增强CD8+T细胞应答并增敏免疫检查点抑制剂治疗

　　本研究发现FADD（Fas相关死亡结构域）在肝细胞癌（HCC）中通过磷酸化激活后入核与Sam68互作，上调NF-κB介导的CCL5转录，促进CD8+T细胞肿瘤浸润及功能活化，从而逆转免疫检查点抑制剂（ICI）耐药。该机制为HCC免疫联合治疗提供了新靶点。

　　

引言

肝细胞癌（HCC）具有高度异质性和免疫抑制性微环境特征，多数患者对免疫检查点抑制剂（ICI）单药治疗反应有限。研究表明，将"冷"肿瘤转化为"热"肿瘤是提高ICI疗效的关键。淋巴细胞上皮样肝癌（LEL-HCC）作为一种特殊亚型，具有密集的CD8⁺T细胞浸润和较好的预后表现，为研究免疫活化机制提供了理想模型。

FADD表征热肿瘤微环境

通过全外显子测序和TCGA-LIHC数据集分析，发现11q13.3染色体区域扩增的HCC肿瘤表现出热肿瘤微环境特征，包括M1型巨噬细胞和CD8⁺T细胞比例增加。该区域内的FADD基因表达与521个免疫相关基因呈最强正相关，且在淋巴细胞签名高的肿瘤中显著上调。临床样本验证显示，FADD高表达与CD8⁺T细胞浸润密度正相关，且患者总生存期和无病生存期显著延长。值得注意的是，FADD^high/CD8^low患者亚群生存较差，提示单纯FADD高表达不足以保证T细胞浸润，其功能可能受翻译后修饰调控。

FADD调控CD8⁺T细胞抗肿瘤免疫

在免疫活性小鼠模型中，Fadd敲除的PD-1敏感（PD-1S）肿瘤重量显著增加，且肿瘤细胞凋亡减少，而在免疫缺陷小鼠中无此现象。流式细胞术分析显示Fadd缺失导致CD8⁺T细胞比例和绝对数量下降，IFNγ产生减少。相反，在PD-1耐药（PD-1R）肿瘤中过表达Fadd可抑制肿瘤生长并增加CD8⁺T细胞浸润。体外实验表明FADD调控不影响肿瘤细胞增殖和TNFα诱导的凋亡，提示其通过非经典途径发挥作用。

CCL5–CCR5趋化通路介导T细胞迁移

通过细胞因子筛选和验证，发现FADD过表达显著上调CCL5、CXCL11和IL10表达，其中CCL5与FADD相关性最显著。Transwell和动物实验证实FADD通过促进CCL5分泌介导CD8⁺T细胞向肿瘤迁移，该效应可被CCL5中和抗体阻断或重组CCL5补救。人源化小鼠模型进一步显示CCR5⁺CD8⁺T细胞优先浸润FADD高表达肿瘤，且该亚群具有更强的IFNγ和TNFα产生能力。

磷酸化FADD激活NF-κB转录机制

生物信息学分析预测CCL5启动子区存在NF-κB结合 motif。实验证实野生型而非S194A突变型FADD可激活NF-κB通路（p-IκBα^Ser32和p-p65^Ser536上调），并促进CCL5表达。染色质免疫沉淀验证磷酸化FADD增强NF-κB-p65在CCL5启动子的结合。机制上，磷酸化FADD（p-FADD^Ser194）核定位后与Sam68形成复合物，协同增强NF-κB转录活性。Sam68敲除显著抑制FADD介导的NF-κB活化和CCL5表达。

ICI治疗诱导FADD磷酸化正反馈环路

研究发现IFNγ和TNFα处理可时间依赖性诱导FADD磷酸化和核转位，并上调PLK1、CKIα和AURKA表达。PLK1敲除特异性抑制细胞因子诱导的FADD磷酸化和NF-κB活化。在动物模型中，抗PD-1治疗仅在ICI敏感肿瘤中诱导IFNγ/TNFα分泌和FADD磷酸化，形成"细胞因子-FADD磷酸化-CCL5分泌-T细胞招募-细胞因子释放"的正反馈环路，而在耐药肿瘤中该环路失效。

靶向FADD克服ICI耐药

在PD-1S肿瘤中，Fadd敲除显著削弱抗PD-1疗效，降低CD8⁺T细胞功能和生存获益。而在PD-1R肿瘤中，序贯治疗（抗PD-1后给予AAV-Fadd或FADD激动剂ADT-OH）可显著抑制肿瘤生长并延长生存。ADT-OH处理增加p-FADD^Ser191水平、CCL5浓度和CD8⁺T细胞浸润，并增强IFNγ/TNFα产生。临床数据分析显示FADD/CCL5/CD8A签名在ICI应答者中显著高表达。

讨论与展望

本研究揭示了FADD磷酸化在塑造HCC免疫微环境中的关键作用，突破了其传统凋亡相关功能的认知局限。发现的正反馈环路为序贯免疫治疗策略提供了理论依据。未来研究需进一步解析FADD-Sam68相互作用的结构基础，探索其他NF-κB调控的免疫相关分子贡献，并验证p-FADD作为生物标志物的临床价值。靶向FADD磷酸化联合ICI治疗有望为HCC患者提供新的治疗策略。