4HPR纳米制剂通过调控MAPKAPK3/Bax磷酸化线粒体转位通路诱导神经母细胞瘤凋亡的新机制

　　本研究开发了人血清 albumin (HSA) 纳米载药系统，通过下调MAPKAPK3/3pK信号通路，抑制Bax磷酸化并促进其线粒体转位，从而显著增强4HPR（N-(4-hydroxyphenyl) retinamide）在神经母细胞瘤(NB)中的凋亡诱导能力，为克服药物低生物利用度提供了创新治疗策略。

　　

亮点

• 首次构建基于人血清白蛋白(HSA)的4HPR纳米制剂，显著提升疏水性药物的生物利用度

• 纳米制剂通过诱导活性氧(ROS)生成和Bax/Bcl-2比例失衡，激活线粒体凋亡通路

• 创新性发现MAPKAPK3/3pK直接调控Bax蛋白磷酸化状态，抑制其线粒体转位功能

• 免疫共沉淀实验证实MAPKAPK3与Bax存在直接相互作用，揭示新型激酶-底物调控关系

• 纳米载药系统通过靶向MAPKAPK3-Bax信号轴，增强神经母细胞瘤细胞对4HPR的敏感性

材料与方法

材料

人血清白蛋白(HSA)购自Reliance生命科学(A2153)，乙醇来源于Merck(1.00983.0511)。实验采用MTT染料(MB186)、戊二醛(RM5927)、DAPI核染色剂(MB097)、MitoTracker Green线粒体探针(M7514)、罗丹明B(A5102)、Bax抗体(SC-20067)、非必需氨基酸(ACL006)、高浓度谷氨酰胺(HiGluta XL, TCL030)、DMEM培养基(AL162S)和胎牛血清(FBS, RM9955)。

4HPR-HSA纳米颗粒制备

采用去溶剂化法制备HSA纳米颗粒：将2% HSA水溶液(pH 8.2)在800 rpm持续搅拌条件下逐滴加入乙醇直至溶液变浑浊，随后加入0.5%戊二醛进行交联固化。4HPR药物通过疏水相互作用装载入纳米颗粒核心，未包封药物通过超速离心去除。

纳米颗粒表征

4HPR属于生物药剂学分类系统(BCS) IV类药物，其正辛醇-水分配系数达6.31 logP，极低的水溶性严重限制生物利用度。通过HSA纳米载药策略，空白纳米颗粒与4HPR载药颗粒的平均流体动力学尺寸分别为131.8 nm和148.3 nm，多分散指数(PDI)低于0.2表明体系单分散性良好。Zeta电位测量显示表面电荷为-18.7 mV，确保胶体稳定性。透射电镜成像证实颗粒呈球形且单分散，药物包封率达78.3%，载药量为8.71%。体外释放研究显示72小时内持续释放符合Korsmeyer-Peppas动力学模型。