雷公藤红素脂质体通过重塑癌相关脂肪细胞驱动的免疫抑制微环境增强三阴性乳腺癌抗PD-L1疗效

　　本研究开发了雷公藤红素脂质体(Cel/Lip)新型递送系统，通过调控癌相关脂肪细胞(CAAs)介导的膜结合PD-L1(mPD-L1)上调和PD-L1++细胞外囊泡(EVs)分泌，重塑免疫抑制微环境，显著增强抗PD-L1(aPD-L1)疗法对三阴性乳腺癌(TNBC)的治疗效果。

　　

亮点

材料

化学品与试剂：雷公藤红素(Cel，HPLC纯度≥99%)由毕得医药(上海)提供。胆固醇(Cho)和大豆磷脂(SPC)购自AVT制药技术有限公司(上海)。油红O染色试剂盒购自碧云天(北京)。小鼠TGF-β和TNF-α ELISA试剂盒由江苏酶联生物科技有限公司提供。TUNEL试剂盒购自碧云天(上海)。逆转录和SYBR Green qPCR试剂购自TAKARA(日本)。

成功诱导成熟脂肪细胞

3T3-L1小鼠前脂肪细胞在分化前呈现典型的纺锤形形态。经过三个周期的诱导处理(支持信息图S1A)，成熟脂肪细胞发生明显的形态转化，获得圆形形态，显微镜下可见大量细胞内脂滴(支持信息图S1B和C)。油红O染色进一步证实了脂质积累，成熟脂肪细胞中出现明显的红色染色脂滴，而未分化细胞则无此现象。

讨论

aPD-L1与肿瘤细胞表面的PD-L1高亲和力结合，阻断其与T细胞上PD-1的相互作用，从而恢复T细胞介导的肿瘤杀伤作用。然而最新研究发现，EVs携带的PD-L1可通过循环系统扩散至远处淋巴组织，与T细胞表面的PD-1结合，抑制T细胞活化并促进免疫逃逸。这意味着即使肿瘤局部PD-L1被有效阻断，循环中的PD-L1⁺ EVs仍可导致全身性T细胞耗竭，显著降低aPD-L1疗法的有效性。因此，开发能够同时靶向mPD-L1和PD-L1⁺ EVs的新型策略至关重要。

我们的研究表明，CAAs通过分泌游离脂肪酸和脂肪因子，不仅促进肿瘤细胞mPD-L1表达，还特异性增强PD-L1向EVs的装载。这种双重作用机制共同导致了TNBC免疫抑制微环境的形成。而Cel/Lip系统能够有效干预CAAs与肿瘤细胞之间的旁分泌网络，通过调节脂质代谢同时下调mPD-L1表达和抑制PD-L1⁺ EVs分泌，为克服免疫治疗耐药提供了创新性解决方案。

结论

总之，我们的研究揭示TNBC中CAAs同时上调mPD-L1表达和增加免疫抑制性EVs产生，导致CD8⁺ T细胞功能受损。为克服这一治疗挑战，我们利用乙醇注射技术开发了Cel封装脂质体，该系统通过增强渗透性和滞留效应实现被动肿瘤靶向。所开发的脂质体生产工艺简单，具有强大的药物包封能力和良好的稳定性，为临床转化提供了有力基础。