基于粘度敏感荧光探针的线粒体-溶酶体互作研究揭示铁死亡与帕金森病新机制

　　本研究开发了一种免洗式化学发光成像传感系统（TCLIA），实现了对PCSK9蛋白的高灵敏度、高通量检测（检测限达0.24 pM），并成功构建了天然小分子抑制剂筛选平台。该技术为动脉粥样硬化性心血管疾病（ASCVD）的药物发现提供了新策略，在降血脂中药活性成分鉴定中展现出显著应用价值。

　　

Highlight

本研究首次将石墨烯氧化物（GO）与邻近杂交技术、辣根过氧化物酶（HRP）-DNA偶联物相结合，开发了一种新型均相化学发光免疫分析法（TCLIA）。该方法无需分离洗涤步骤，仅通过简单混合即可在24分钟内完成96个样本中PCSK9蛋白的定量检测，检测限低至0.24 pM，为PCSK9抑制剂的快速筛选提供了革命性技术平台。

Experimental section

Characterization of GO, HRP-DNA3 and the mixture of GO and HRP-DNA3

通过紫外-可见吸收光谱和化学发光光谱对HRP-DNA3进行了表征。如图1A所示，DNA3和HRP的特征吸收峰分别位于260 nm和400 nm处。HRP-DNA3偶联物同时呈现这两个特征峰，证实了HRP与DNA3的成功连接。荧光表征进一步验证了HRP与DNA的结合（支持信息图S1）。图1B显示，当HRP-DNA3与GO混合后，由于GO与DNA之间的强吸附作用以及GO对发光团的能量接收效应，化学发光信号发生显著淬灭，证实了化学发光能量共振转移（CRET）现象的有效发生。

Conclusions

本研究建立的均相化学发光免疫分析方法实现了对PCSK9蛋白的灵敏、便捷和高通量检测。石墨烯氧化物与DNA标记抗体的整合，通过简单混合流程即可在24分钟内完成96个样本的定量检测。HRP与DNA的结合产生稳定型化学发光，确保了测量结果的可靠性。与商业化ELISA试剂盒的直接对比显示，该方法在检测灵敏度、操作便捷性和通量方面具有显著优势。

（注：根据要求已去除文献引用标识[ ]和图示标识Scheme 1/Fig.1等标记）