毛冬青来源Jasurolignoside通过靶向TLR4调控炎症通路缓解急性肺损伤的作用与机制研究

　　本研究针对病毒感染引发的急性肺损伤（ALI）缺乏有效治疗策略的问题，开展了天然化合物Jasurolignoside（JO）靶向TLR4治疗ALI的作用与机制研究。结果表明，JO通过直接结合TLR4（Kd=35.1 μmol·L–1），抑制NLRP3炎症小体和NF-κB/MAPK通路，显著降低炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）表达和免疫细胞浸润，改善肺功能并降低死亡率，为ALI临床治疗提供了潜在药物候选。

　　

急性肺损伤（ALI）是一种由病毒感染等因素引发的严重炎症性疾病，其特征是肺部过度免疫反应导致组织损伤和功能障碍，临床缺乏特效治疗手段。Toll样受体4（TLR4）作为天然免疫的关键模式识别受体，在ALI发病过程中激活NF-κB（核因子κB）和MAPK（丝裂原活化蛋白激酶）信号通路，驱动NOD样受体家族pyrin结构域包含蛋白3（NLRP3）炎症小体组装，促进白细胞浸润和炎症因子风暴，最终导致肺组织破坏。因此，靶向TLR4及其下游信号通路成为ALI治疗的重要策略。

近年来，天然产物因其多靶点、低毒性的特点成为药物研发的热点。毛冬青（Ilex pubescens）作为一种传统中药，已被证明具有抗炎活性，但其具体活性成分及机制尚不明确。本研究从毛冬青中分离得到Jasurolignoside（JO），并深入探究其通过靶向TLR4治疗ALI的潜力，相关工作发表于《Chinese Journal of Natural Medicines》。

为开展本研究，作者综合运用了多种关键技术方法：通过分子对接模拟和细胞热位移实验（CETSA）预测并验证JO与TLR4的结合；采用表面等离子共振（SPR）定量分析结合亲和力（K_d值）；通过Western blotting、ELISA和免疫荧光染色评估NF-κB/MAPK通路活化及炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）表达；利用Co-IP（共免疫沉淀）分析蛋白互作；建立LPS（脂多糖）诱导的小鼠ALI模型，通过肺功能检测、组织病理学分析和免疫组化评价JO的体内疗效及TLR4表达抑制情况。

JO直接结合TLR4并抑制其活性

通过分子对接模拟发现JO可嵌入TLR4的活性口袋，形成稳定相互作用；SPR实验证实JO与TLR4直接结合，K_d值为35.1 μmol·L^–1；CETSA进一步表明JO结合显著提高了TLR4的热稳定性。这些结果从分子和细胞水平证明了JO是TLR4的直接抑制剂。

JO抑制NF-κB/MAPK通路和NLRP3炎症小体活化

在LPS刺激的细胞模型中，JO处理显著降低了NF-κB p65磷酸化和MAPK（p38、JNK、ERK）活化水平；同时，JO抑制了NLRP3、ASC和caspase-1的表达，阻断了IL-1β的成熟和释放。Co-IP实验表明JO干扰了TLR4与下游接头蛋白的相互作用。表明JO通过双重抑制TLR4-NF-κB/MAPK和TLR4-NLRP3轴发挥抗炎作用。

JO减轻LPS诱导的ALI小鼠肺部炎症和损伤

在ALI小鼠模型中，JO处理显著降低了支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞计数；肺组织H&E染色显示JO有效缓解了肺泡壁增厚、出血和炎细胞浸润；免疫组化证实JO抑制了肺组织中TLR4的过度表达。此外，JO治疗还改善了小鼠肺功能参数并显著降低死亡率。

JO抑制炎症因子释放

ELISA检测显示，JO处理显著降低了ALI小鼠血清和BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6的水平，且呈剂量依赖性，进一步证实了JO的系统性抗炎效果。

本研究得出结论：Jasurolignoside（JO）作为从毛冬青中分离的天然化合物，能够直接结合TLR4并抑制其活化，进而通过调控NF-κB/MAPK信号通路和NLRP3炎症小体组装，减少炎症因子释放和免疫细胞浸润，最终缓解ALI病理进程。该研究不仅揭示了JO作为TLR4抑制剂的分子机制，也为ALI的临床治疗提供了具有开发潜力的先导化合物，体现了天然产物在免疫炎症疾病治疗中的重要价值。