TRIM21通过激活BRD4介导的内皮细胞自噬缓解脓毒症相关凝血病

　　本研究发现TRIM21通过促进BRD4蛋白的泛素化降解，激活自噬通路（LC3-II/Beclin1↑、p62↓），显著改善脓毒症相关凝血病（SAC）模型中的炎症反应（IL-1β、IL-6↓）和凝血异常（TF、PAI1、Thrombin↓），并减轻肺组织病理损伤与细胞凋亡。该研究揭示了TRIM21-BRD4-自噬轴在SAC中的关键作用，为脓毒症治疗提供了新靶点。

　　

Abstract

Purpose

探究三结构域蛋白21（TRIM21）在脓毒症相关凝血病（SAC）中调控自噬的作用与机制。

Method

构建TRIM21和溴结构域蛋白4（BRD4）的过表达载体、si-BRD4及空载体，转染至人微血管内皮细胞（HMEC-1）。体外实验中，采用脂多糖（LPS）（40 μg/mL）联合尼日利亚菌素（Nigericin）（20 μM）处理细胞0.5小时建立脓毒症模型。通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测炎症与凝血因子水平；流式细胞术测定细胞内活性氧（ROS）水平及细胞凋亡；免疫共沉淀（CO-IP）验证TRIM21对BRD4泛素化的影响。体内实验采用盲肠结扎穿孔（CLP）法构建小鼠脓毒症模型，术后24小时检测肺组织中炎症与凝血因子（ELISA），苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织病理变化，末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记（TUNEL）染色评估细胞凋亡，免疫组化（IHC）检测纤维蛋白表达。Western blot检测细胞及肺组织中TRIM21、BRD4、自噬相关蛋白（LC3-II、Beclin1、p62）、E-钙黏蛋白和Zonulin-1的表达。

Results

LPS（40 μg/mL）与Nigericin（20 μM）刺激后，HMEC-1细胞中炎症标志物（IL-1β、IL-6）和凝血相关因子（组织因子TF、纤溶酶原激活物抑制剂-1 PAI1、凝血酶Thrombin）显著升高，伴随ROS水平与凋亡细胞增加，LC3-II、Beclin1、E-钙黏蛋白和TRIM21下调，p62、Zonulin-1和BRD4上调。TRIM21过表达或BRD4沉默可显著逆转上述现象，但TRIM21与BRD4共过表达则恢复至模型组表型。CO-IP结果表明TRIM21可促进BRD4泛素化。动物实验中，模型组小鼠肺泡壁破裂溶解伴炎性细胞浸润，肺组织炎症因子（IL-1β、IL-6）与凝血因子（PAI1、Thrombin、TF）升高，p62与Zonulin-1上调，E-钙黏蛋白、LC3-II和Beclin1下调，纤维蛋白阳性细胞数及凋亡显著增加。TRIM21过表达可明显逆转这些结果。

Conclusion

TRIM21通过调控BRD4激活自噬并抑制凝血反应，对SAC发挥治疗作用，可能成为SAC的潜在治疗靶点。