火针联合脉冲射频通过调控PI3K/AKT通路及IGF2/PMP2/CLDN19表达缓解带状疱疹后神经痛大鼠触诱发痛

　　本研究创新性地结合传统中医疗法火针（FA）与现代神经调控技术脉冲射频（PRF），深入探讨了联合疗法对带状疱疹后神经痛（PHN）大鼠模型的治疗作用及机制。结果表明，FA_PRF组合疗法能显著缓解机械性触诱发痛和热痛敏，其作用机制与抑制脊髓星形胶质细胞活化、调节炎症因子（IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10）水平、促进神经修复相关分子（IGF2、PMP2、CLDN19）表达及抑制HOXC8表达密切相关，且PI3K/AKT信号通路在该过程中发挥关键调控作用。该研究为PHN的临床治疗提供了新的联合策略和理论依据。

　　

研究背景

带状疱疹后神经痛（PHN）作为带状疱疹最常见的并发症，表现为持续性神经病理性疼痛，临床治疗难度大，约40%–50%患者经综合干预后仍疗效不佳。火针（FA）作为传统中医针灸疗法，与脉冲射频（PRF）等神经调控技术近年来被逐步应用于PHN治疗，但二者联合使用的效应及机制尚未明确。本研究通过建立PHN大鼠模型，系统评价FA与PRF单独及联合应用对触诱发痛的干预效果，并深入探索其潜在分子机制。

研究方法

研究选用健康成年雄性Sprague–Dawley大鼠，随机分为对照组、PHN模型组、FA治疗组、PRF治疗组及FA_PRF联合治疗组。通过足垫接种水痘-带状疱疹病毒（VZV）构建PHN模型，于接种后第15日开始干预。FA干预选取GB30（环跳）及EX-B2（夹脊）穴位，以烧红针尖快速刺入；PRF干预参数设定为频率2Hz、温度42°C、时长120秒。采用von Frey纤维丝评估机械性痛阈，Hargreaves仪检测热痛敏潜伏期。于接种后第37日采集脊髓组织与脑脊液，通过免疫荧光染色、Western blot及ELISA等技术分析星形胶质细胞（GFAP）与小胶质细胞（CD68）活化、神经元凋亡（Bax、Bcl-2、Calpain）、炎症因子（IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10）水平及关键分子（IGF2、PMP2、CLDN19、HOXC8）表达变化，并利用PI3K/AKT激动剂（740Y-P与SC79）验证该通路在联合疗法中的作用。

研究结果

动物模型验证与行为学变化

VZV接种后第8日，大鼠接种侧足垫开始出现机械性触诱发痛，痛阈显著降低，热痛敏潜伏期缩短，并于第50–63日逐渐恢复基线，成功模拟了PHN的病理特征。行为学测试显示，与PHN组相比，FA_PRF联合治疗显著提高机械痛阈并延长热痛敏潜伏期，效果优于FA或PRF单独干预，且单疗法组效果不稳定。

脊髓胶质细胞活化与神经元凋亡

免疫荧光结果显示，PHN组脊髓GFAP阳性星形胶质细胞数量显著增加，而CD68阳性小胶质细胞无显著变化。FA_PRF联合干预显著抑制星形胶质细胞活化，减少神经元凋亡标志物Bax与Calpain表达，提升抗凋亡蛋白Bcl-2水平，促进神经元修复（NF200表达回升）。

炎症因子调控

ELISA检测发现，PHN组脊髓组织中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著升高，抗炎因子IL-10降低。FA_PRF联合治疗可逆转上述变化，显著降低促炎因子、提升IL-10水平，且效果较单疗法更显著，表明联合疗法具有协同抗炎作用。

分子机制探索

mRNA测序与Western blot分析揭示，FA_PRF联合治疗上调脊髓组织胰岛素样生长因子2（IGF2）、外周髓鞘蛋白2（PMP2）及紧密连接蛋白19（CLDN19）表达，下调同源框蛋白C8（HOXC8）表达。GO与KEGG富集分析表明，差异表达基因显著富集于神经屏障紧密连接、PI3K/AKT信号通路、ECM受体相互作用及TGF-β通路等与神经修复与炎症调控相关过程。

PI3K/AKT通路验证

使用PI3K/AKT激动剂（740Y-P+SC79）可逆转FA_PRF联合疗法的镇痛效应，表现为机械痛阈与热痛敏潜伏期回落、星形胶质细胞再度活化、炎症因子水平复常及IGF2、PMP2、CLDN19表达下调、HOXC8表达回升，证实PI3K/AKT通路在联合疗法调控神经修复与炎症反应中起核心作用。

讨论与结论

本研究首次系统整合中医火针与西医脉冲射频技术，证实二者联合应用可通过多靶点、多通路协同发挥镇痛效应。机制上，FA_PRF联合干预抑制脊髓星形胶质细胞活化，调节炎症因子网络，上调IGF2、PMP2、CLDN等神经修复相关分子表达，下调疼痛相关基因HOXC8表达，且上述效应依赖PI3K/AKT信号通路激活。该研究为PHN的临床治疗提供了新颖的联合策略与坚实的实验依据，同时深化了对传统医学与现代技术交叉融合机制的理解。未来研究需进一步优化动物模型、开发体外模拟体系，并深入探索PI3K/AKT通路下游网络及其与NF-κB等通路的交叉对话。