ApoE介导的溶瘤腺病毒纳米颗粒突破血脑屏障实现胶质母细胞瘤免疫治疗

　　本文推荐一种基于ApoE蛋白冠的溶瘤腺病毒纳米颗粒（OA@Aβ-am NPs）新策略，通过修饰β淀粉样肽（Aβ-am）主动募集血浆载脂蛋白E（ApoE），借助低密度脂蛋白受体相关蛋白1（LRP1）介导的双重靶向作用，突破血脑屏障（BBB）并精准靶向胶质母细胞瘤（GBM），成功将"冷"肿瘤转化为"热"肿瘤，为GBM免疫治疗提供创新性解决方案。

　　

亮点

通过基因表达谱交互分析（GEPIA）数据库分析发现，CXADR在多种肿瘤类型中表达水平存在显著差异，其中宫颈鳞癌（CESC）、结肠腺癌（COAD）、食管癌（ESCA）等肿瘤中呈现高表达特征（图S1A）。Western blotting验证表明，与正常脑组织相比，胶质母细胞瘤组织中CXADR表达显著下调（图S1B），这直接导致天然OA对GBM细胞的感染效率低下。为解决此瓶颈，我们成功构建了基于ApoE-LRP1相互作用的OA@Aβ-am NPs纳米平台。

OA@Aβ-am NPs的制备与表征

将2 mL DSPE-PEG₂₀₀₀-COOH（1 mg/mL）溶于MES缓冲液，加入22.5 μL EDC（0.25 M）和22.5 μL NHS（0.25 M），室温反应2小时至溶液澄清。调至pH 7.5后加入0.5 mL Aβ-am肽（1 mg，分子量1060 g/mol）的PBS溶液，4℃搅拌过夜。通过3500分子截留量的透析袋在PBS中透析8小时去除未反应肽段，最终冻干获得DSPE-PEG-Aβ-am复合物。透射电镜显示OA@Aβ-am NPs呈规整球形结构，动态光散射检测显示其水合粒径为135.7 nm，zeta电位为-12.4 mV（图1A-B）。SDS-PAGE证实Aβ-am能有效招募血浆中的ApoE形成蛋白冠（图1C）。

体外BBB穿透与肿瘤靶向能力验证

建立血脑屏障体外模型（hCMEC/D3细胞）与U87-MG胶质瘤细胞共培养体系。通过荧光追踪发现，OA@Aβ-am NPs在4小时内的BBB穿透效率较游离OA提升6.2倍（图2A）。激光共显微镜观察显示纳米颗粒能通过LRP1介导的转胞吞作用跨越内皮细胞层（图2B）。在Transwell小室中，抑制LRP1后NPs的穿透效率下降58.3%，证实其穿透机制依赖于ApoE-LRP1相互作用（图2C）。

体内靶向性与抗肿瘤效果评估

通过活体成像技术发现，Cy5标记的OA@Aβ-am NPs在静脉注射后6小时即可在颅内肿瘤部位显著富集（图3A）。治疗实验显示：OA@Aβ-am NPs治疗组小鼠生存期延长至48天，显著优于游离OA组（32天）和PBS组（25天）（图3B）。肿瘤组织切片显示NPs治疗组出现大量CD8⁺ T细胞浸润（图3C），HMGB1和CRT表达上调证实免疫原性细胞死亡（ICD）的激活（图3D）。

结论

本研究成功开发了一种基于ApoE蛋白冠工程的溶瘤腺病毒纳米平台，通过Aβ-am肽介导的ApoE招募机制，实现了血脑屏障高效穿透与胶质瘤精准靶向的双重功能。该平台不仅能直接溶解肿瘤细胞，更重要的是能重塑肿瘤免疫微环境，将免疫抑制型的"冷"肿瘤转化为免疫激活型的"热"肿瘤，为胶质母细胞瘤的免疫治疗提供了创新性解决方案。