基于分析质量源于设计（AQbD）的RP-HPLC方法开发与验证：用于胡黄连苷II（Picroside II）的定量分析及其在药品质量控制中的应用

　　本研究针对传统中药胡黄连中活性成分胡黄连苷II（Picroside II）缺乏高效、稳健定量分析方法的问题，采用分析质量源于设计（AQbD）策略，结合Box-Behnken实验设计，开发并验证了一种RP-HPLC分析方法。该方法在6–14 μg/mL范围内线性良好（R2=0.9998），精密度（%RSD<2%）、准确度（回收率98.62–101.35%）和稳健性（%RSD<1%）均符合ICH Q2(R1)要求，并成功应用于制剂含量测定（99.46%），为Picroside II的质量控制提供了可靠手段。

　　

胡黄连（Picrorhiza scrophulariiflora Pennell）作为传统中药，在治疗慢性发热、肝病和心力衰竭等方面具有悠久历史，其活性成分胡黄连苷II（Picroside II）因具有神经保护、肝保护、抗炎和抗氧化等多种药理活性而备受关注。然而，尽管Picroside II的重要性日益凸显，其在药品质量控制中的定量分析方法仍存在不足：已有报道的HPLC方法往往依赖于传统试错法开发，缺乏系统性的质量风险管理策略，导致方法稳健性差、灵敏度低，且未能充分利用现代质量源于设计（Quality by Design, QbD）理念提升方法可靠性。因此，开发一种基于科学原则、具有高稳健性和重现性的分析方法，成为确保Picroside II药品质量与安全性的迫切需求。

为此，研究人员在《Future Journal of Pharmaceutical Sciences》上发表了一项研究，采用分析质量源于设计（Analytical Quality by Design, AQbD）策略，结合Box-Behnken实验设计（Design of Experiment, DoE），开发了一种反相高效液相色谱（Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography, RP-HPLC）方法，用于Picroside II在原料药和制剂中的定量分析。该方法不仅显著提升了分析方法的可靠性和效率，还为复杂中药成分的质量控制提供了新思路。

在技术方法上，作者首先通过AQbD框架明确了分析目标概况（Analytical Target Profile, ATP），并识别出关键方法参数（Critical Method Parameters, CMPs）和关键质量属性（Critical Quality Attributes, CQAs）。利用Box-Behnken设计对无机改性剂比例、进样体积和流速进行优化，通过17次实验建立了预测模型。色谱分离采用Waters XBridge RP C18柱（4.6 mm × 150 mm, 5.0 μm），流动相为0.1%甲酸-乙腈（77:23, v/v），流速1.0 mL/min，检测波长266 nm。方法验证遵循ICH Q2(R1)指南，涵盖线性、精密度、准确度、特异性、稳健性和强制降解研究等内容。制剂样本来源于市售Picrolax胶囊（150 mg）。

方法开发与验证研究

通过初步研究，确定甲酸缓冲液-乙腈作为流动相可提供良好峰形和系统适用性。利用AQbD策略，通过三维响应面图和扰动图分析各因素对保留时间、拖尾因子和理论塔板数的影响，最终确定最优色谱条件：流动相比77:23，进样体积20 μL，流速1.0 mL/min，此时所有CQAs均符合预期，合意性值接近1.0。

方法验证研究

线性范围6–14 μg/mL内，Picroside II呈现良好线性（R2=0.9998）。精密度试验中，重复性、日内和日间精密的%RSD均小于2%。准确度试验在80%、100%和120%加标水平下，回收率为98.62–101.35%，%RSD小于1%。检测限（LoD）和定量限（LoQ）分别为0.70 μg/mL和2.0 μg/mL，表明方法灵敏度高。稳健性试验中，流速、波长和流动相比例的微小变动均未显著影响峰面积和保留时间（%RSD<1%），证明方法鲁棒性强。系统适用性参数（保留时间、峰面积、拖尾因子和理论塔板数）的%RSD均小于1%，符合要求。特异性通过峰纯度评估证实，标准品与样品溶液中Picroside II的纯度角均小于纯度阈值，无杂质干扰。

强制降解研究

在酸、碱、氧化、干热、紫外和日光照射条件下进行强制降解试验。结果显示，Picroside II在酸性和碱性条件下部分降解，氧化条件下显著降解，而在热和光条件下稳定性良好，表明方法能有效分离降解产物与主峰，适用于稳定性指示分析。

分析绿色度评估

使用AGREE工具评估方法绿色性，得分为0.69（满分1），表明该方法在废物产生、毒性和操作安全方面具有较好环保性能。

该研究通过AQbD驱动的RP-HPLC方法，成功实现了对Picroside II的快速、准确、稳健定量，方法验证各项参数均符合ICH指南要求。强制降解研究证明方法能有效区分降解产物，绿色评估进一步凸显其环保优势。这一方法不仅适用于药品质量控制，还可推广至研究机构和检测实验室，满足监管要求，为中药活性成分的分析提供了新范式。此外，该研究体现了AQbD在分析方法开发中的广泛应用前景，通过系统性优化和风险管理，显著提升了方法可靠性，为后续相关研究奠定了坚实基础。