右美托咪定影响艾司氯胺酮及其代谢产物去甲氯胺酮药代动力学的HPLC-MS/MS方法开发与DDI机制研究

　　本刊推荐：本研究建立了一种灵敏可靠的HPLC-MS/MS方法，成功应用于比格犬血浆中艾司氯胺酮（ESK）及其活性代谢物去甲氯胺酮（NORK）的同步定量分析。通过药代动力学（PK）研究揭示右美托咪定（DEX）通过抑制细胞色素P450（CYP）3A4代谢酶，显著提高ESK和NORK的系统暴露量（AUC(0-∞)增加114.7%和43.17%），为临床麻醉药物联用安全提供重要依据。

　　

方法开发

本研究针对临床常用麻醉辅助用药艾司氯胺酮（Esketamine, ESK）及其活性代谢物去甲氯胺酮（Norketamine, NORK）的检测需求，开发了高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）同步定量分析方法。采用乙腈蛋白沉淀法进行血浆样本前处理，以普罗地芬（Proadifen）为内标，色谱分离使用Shimadzu VP-ODS C18柱（4.6 × 150 mm, 5 μm），流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液（60:40），流速0.3 mL/min。在电喷雾正离子（ESI+）模式下，通过多反应监测（MRM）模式检测，ESK、NORK和内标的质荷比（m/z）分别设定为238.10→125.10、224.10→125.10和354.20→209.00。

方法学验证完全符合《中国药典》（2020年版）要求。ESK和NORK在1–400 ng/mL浓度范围内呈现良好线性（R²>0.995），定量下限（LLOQ）为1 ng/mL。日内、日间精密度（RSD%）均低于8.13%，准确度在96.83%–103.25%之间。提取回收率超过80.16%，基质效应介于97.49%–103.80%，且在不同储存条件下均表现良好稳定性。

药物相互作用研究设计

采用6只比格犬（8–10 kg）进行自身对照研究。第一阶段单次肌肉注射ESK（1 mg/kg），第二阶段经7天连续静脉注射DEX（2 μg/kg）预处理后，联合施用相同剂量ESK。采集24小时内12个时间点血浆样本，通过建立的分析方法检测ESK和NORK浓度，使用DAS 2.0软件计算药代动力学参数，采用独立样本t检验进行统计学分析（P<0.05为显著差异）。

药代动力学相互作用结果

DEX联合用药显著改变ESK药代动力学特征：ESK的峰浓度（C_max）提高53.66%，药时曲线下面积（AUC_(0-t)和AUC_(0-∞)分别增加117.38%和114.70%，消除半衰期（t_1/2）延长，表观分布容积（Vz/F）增大而清除率（CLz/F）降低。

NORK代谢动力学同样受影响：C_max降低12.75%，但AUC_(0-t)和AUC_(0-∞)分别增加45.27%和43.17%，t_1/2从2.38小时延长至3.44小时，Vz/F和CLz/F同步下降。

机制讨论

这种相互作用源于双方共同的代谢途径：ESK主要通过CYP2B6、CYP3A4和CYP2C9代谢为NORK，而DEX既是CYP3A4抑制剂，又是犬肝微粒体的强抑制剂。DEX通过抑制CYP3A4活性，延缓ESK向NORK的转化过程，同时阻碍NORK的进一步羟基化代谢，导致母药与代谢物系统暴露量同步升高。这种代谢抑制效应可能增强ESK的麻醉镇痛作用和NORK的神经调节活性，对临床联合用药的安全性评估具有重要意义。

结论

本研究建立的HPLC-MS/MS方法满足生物样本分析要求，成功应用于比格犬药代动力学研究。结果表明DEX通过抑制CYP450代谢酶活性，显著改变ESK和NORK的药代动力学特征，导致两者系统暴露量增加。这一发现为临床麻醉联合用药方案优化提供了重要药代动力学依据，提示需关注联合用药时的血药浓度监测和剂量调整。