miPEP31通过协同转录因子Trps1抑制血管平滑肌细胞增殖及其在高血压血管重塑中的保护作用

　　本研究发现由pri-miRNA-31编码的小肽miPEP31能与转录因子Trps1协同作用，抑制miR-31表达，从而有效抑制血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和血管重塑。该研究揭示了miPEP31在高血压靶器官保护中的治疗潜力，为心血管疾病提供了新的治疗策略。

　　

Abstract

先前研究发现，由pri-miRNA-31编码的miPEP31能够抑制pri-miRNA-31的转录，并减轻血管紧张素II（Ang II）诱导的高血压。miR-31参与原发性血管平滑肌细胞（VSMCs）的增殖过程，这是高血压血管重塑中的关键功能细胞。然而，miPEP31在VSMCs增殖中的作用和机制尚不清楚。本研究旨在探讨miPEP31是否在VSMC增殖中发挥重要作用并影响血管重塑。

Introduction

肽是生物活性的氨基酸单体，分子量通常小于5000 Da。与蛋白质相比，肽尺寸较小，能够更深入地渗透组织，符合潜在治疗剂的要求。此外，肽具有高靶点选择性、高效性和低免疫原性等优点，使其成为理想的治疗候选分子。

miPEP31是一种由microRNA-31初级转录本（pri-miR-31）编码的44个氨基酸肽，能选择性抑制miR-31转录，促进T_reg细胞分化。研究发现，miR-31在高血压及其肾损伤的起始和进展中起重要调控作用。miR-31在Ang II处理的小鼠脾CD4⁺ T细胞和肾脏白细胞中表达上调。删除miR-31可降低血压，改变肾脏中T_reg细胞和巨噬细胞的积累，并减轻Ang II诱导的肾小球肥大。最近的研究还发现，miPEP31缺陷会加重而外源性miPEP31给药则减轻Ang II诱导的收缩压升高、肾脏T_reg细胞减少和肾功能损害。

高血压既是血管重塑的原因也是其结果，血管重塑以动脉壁结构和组成的改变为特征，而miPEP31被证明在小鼠动脉中内源性表达。然而，miPEP31在血管重塑中的作用仍不清楚。

血管平滑肌细胞（VSMC）是血管中膜的主要细胞成分。虽然在成年动物中VSMC是高度分化的细胞，增殖和迁移活性较低，但在应对不同血管损伤时，它可能通过过度增殖和迁移作为血管重塑的积极参与者，促进多种心血管疾病如高血压、动脉粥样硬化和再狭窄的发展和进展。研究表明，miR-31参与血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB）诱导的原代VSMCs增殖，且miR-31在Ang II给药小鼠的主动脉中表达上调。因此，我们推测miPEP31作为miR-31的转录抑制因子，可能抑制VSMCs增殖和血管重塑。

Methods

Peptides and antibodies against miPEP31

miPEP31、乱序肽（scPEP）和FAM标记的miPEP31（FAM-miPEP31）由GenScript Biotech Corporation合成，纯度验证大于95%。使用序列如下：miPEP31: MRDWASVSSLGSGLWKERLWKSITTKRDGIAPVTRNWRGGKMLA；scPEP: GWRTKDWSISPLKAVLGWIRTSGGDTRMNKLARLAKESWVRSMG。按先前描述定制兔抗miPEP31多克隆抗体。

Animals

健康雄性C57BL/6J（WT）小鼠（8-12周龄）购自上海斯莱克实验动物有限公司。按先前描述生成并鉴定miPEP31^?/?小鼠。所有小鼠在无特定病原体（SPF）条件下饲养，符合美国国立卫生研究院实验室动物护理和使用指南，并获得上海交通大学医学院科学调查委员会的批准（SYXK-2003-0026）。

Animal treatment

按先前描述进行Ang II输注和肽给药。简要来说，小鼠通过2%异氟烷吸入麻醉。皮下植入微型泵（Alzet, Cat#1002）以输送Ang II（750 ng/kg/分钟用于静脉注射肽实验或550 ng/kg/分钟用于miPEP31^?/?实验）或0.9% NaCl，持续2周。对于肽治疗组，小鼠在输注后第1天及每2天静脉注射50 μg miPEP31或scPEP。

Histology and immunofluorescence

主动脉用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋并切成5 μm切片，进行苏木精-伊红（HE）或Masson三色染色。使用Image-Pro Plus 6.0软件量化内膜和中膜厚度及纤维化区域。免疫荧光染色使用抗α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）一抗（CST, Cat# 48838，稀释1:250），然后孵育荧光标记二抗。使用Carl Zeiss AXIO显微镜捕获主动脉图像，并使用ImageJ软件计算α-SMA染色区域。

Cell culture

购买商业小鼠VSMC细胞系MOVAS。从7-8周龄雄性C57BL/6J小鼠胸主动脉分离原代VSMCs。简要来说，处死小鼠，分离胸主动脉并维持于培养基中。机械去除动脉外膜组织，将中膜组织切成小块进行SMC培养。细胞在Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM, Gibco, Cat#11965092）中培养，添加5%（MOVAS）或10%（原代VSMCs）胎牛血清（FCS, Gibco, Cat#10099141），并用0.25%（MOVAS）或0.125%（原代VSMCs）胰蛋白酶传代。使用第2至4代的原代VSMCs。为诱导VSMC增殖，细胞血清剥夺24小时，然后用PDGF-BB（PeproTech Inc., Cat#315-18）刺激。如需要，在PDGF-BB孵育前30分钟将miPEP31加入培养基。

Cell proliferation assay

使用CCK-8法分析PDGF-BB诱导的VSMCs增殖。将细胞以每孔3000个（MOVAS）或5000个（原代VSMCs）的密度接种于96孔板，培养24小时。用PDGF-BB处理（有或无miPEP31）后，培养基更换为含10%（v/v）CCK-8试剂（US Everbright INC, Cat#C6005）的DMEM，孵育90分钟。使用VarioSkan Flash酶标仪（Thermo Fisher Scientific）在450 nm检测吸光度。对于感染shRNA表达慢病毒的MOVAS细胞，为避免抑制靶基因对基线CCK-8计数的影响，采用细胞周期 assay结合增殖细胞核抗原（PCNA）免疫印迹评估MOVAS增殖。对于细胞周期 assay，将MOVAS以3×10⁵个细胞的密度接种于60 mm dish。PDGF-BB处理后，通过胰蛋白酶消化收集细胞，并用70%乙醇在4°C固定2小时。固定细胞用碘化丙啶（PI）/RNase溶液（CST, Cat# 4087）在37°C染色2小时。通过流式细胞术分析细胞周期的DNA含量，并计算各细胞时相的百分比。

Immunocytochemistry

细胞在玻璃盖片上生长，并用4%多聚甲醛在室温固定30分钟。固定细胞与抗miPEP31（1:100）和抗α-SMA（1:250）一抗孵育，然后与荧光标记二抗孵育1小时。对于用FAM-miPEP31处理的MOVAS细胞，存活在盖片上的细胞用PBS洗涤，然后用Hoechst 33342（Invitrogen, Cat# H3570）在37°C染色30分钟。使用Carl Zeiss AXIO显微镜捕获细胞图像。

Western blot

细胞在含蛋白酶抑制剂cocktail和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液（Millipore, Cat# 20-188）中裂解，通过BCA法测定蛋白浓度。取5、15和20 μg总蛋白进行SDS-PAGE，分别用于PCNA、miPEP31和Trps1免疫印迹。凝胶上的蛋白然后转移至聚偏二氟乙烯膜（Millipore, Cat#ISEQ00010），并与抗PCNA（1:3000）（CST, Cat#13110）、抗miPEP31（1:1500）或抗Trps1（1:1000）（Thermo Fisher Scientific, Cat#A303-563A）抗体在4°C孵育过夜。使用辣根过氧化物酶偶联二抗检测靶蛋白。通过增强化学发光系统（Tanon Life Science, Cat#180-5001）显色特定蛋白条带。通过光密度法量化条带强度。

Quantitative RT??PCR

使用TRI Reagent（Sigma-Aldrich, Cat#9424）提取MOVAS总RNA。使用HiScript III All-in-one RT SuperMix Perfect（Vazyme, Cat# R333-01）进行反转录。使用SYBR Green Master Mix（TaKaRa, Cat# RR420A）在ABI QuantStudio7 Flex（Applied Biosystems）上进行qRT??PCR。所有基因的相对表达水平通过内参基因GAPDH标准化确定。引物序列如下：小鼠Trps1正向: CTGGCACGACCTATGTATGG，Trps1反向: TAATAATCTGCTCGCCGTTG；小鼠GAPDH正向: TGTGTCCGTCGTGGATCTGA，GAPDH反向: CCTGCTTCACCACCTTCTTGA。对于miR-31定量，使用商业反转录引物和扩增引物检测小鼠成熟miR-31-5p（RiboBio Biotech LTD., Cat#MQPS0002708-1）和U6 snRNA（Cat#MQPS0000002-1）。通过标准化至内源性U6表达确定miR-31表达。

Flow cytometry

为量化外源性miPEP31的细胞渗透性，用FAM-miPEP31处理的MOVAS细胞经胰蛋白酶消化和PBS洗涤，使用Beckman Coulter CytoFLEX仪器通过流式细胞术测量FAM强度。使用FlowJo软件计算平均荧光强度（MFI）。为评估MOVAS凋亡程度，使用商业FITC标记的Annexin V/PI双染色试剂盒（Vazyme, Cat# A211-01），按照制造商协议操作。简要来说，将MOVAS细胞以每孔1.5×10⁵个细胞的密度传代至6孔板。miPEP31处理后，用无EDTA胰蛋白酶 detached细胞，用冰冷PBS洗涤，并重悬于结合缓冲液。通过添加FITC-Annexin V和PI在室温孵育20分钟实现染色。通过流式细胞术测定FITC-Annexin V和PI荧光强度。

shRNA

为实现Trps1表达的稳定敲低，我们生产了含嘌呤霉素抗性基因的慢病毒，表达靶向小鼠Trps1 3'UTR区域的shRNA（序列: CCTTAGCACTTAGCACAATTA），并将病毒以每细胞200个病毒颗粒的滴度转导至培养的MOVAS。使用添加嘌呤霉素（4 μg/ml）的培养基选择感染细胞用于进一步研究。

Mass spectrometry analysis

NIH 3T3细胞（1-2×10⁸）裂解用于抗miPEP31抗体工程化免疫沉淀。免疫沉淀蛋白用10 mM Tris (pH 7.5)、150 mM NaCl和0.5 mM EDTA洗涤3次，然后用200 mM甘氨酸 (pH 2.5)洗脱用于质谱分析。所有质谱实验在连接至Easy-nLC 2000 via an Easy Spray（Thermo Fisher Scientific）的QE-Plus质谱仪上进行。所有MS/MS离子谱数据使用PEAKS 8.0软件包（Bioinformatics Solutions）进行处理、从头测序和数据库搜索。

Protein??protein interaction prediction

通过AlphaFold 3系统（http://alphafoldserver.com/）预测蛋白质-蛋白质相互作用模型。

EMSA

将MOVAS接种于10 cm dish并培养至亚汇合条件。使用商业核蛋白分离试剂盒（SolarBio Life Sciences, Cat# EX1470）提取MOVAS核蛋白。使用LightShift Chemiluminescent EMSA试剂盒（Thermo Fisher Scientific, Cat#20148）进行凝胶移位 assay。简要来说，将4 μg MOVAS核蛋白等分试样混合至20 μl反应体系，含生物素化双链寡核苷酸探针（20 fmol）（序列: 5’–3’ AATTACTTTAATAGTGACATGTTTGACTGCCGATTCTTATTTTTTGATCAAGGTAGTGGA），结合缓冲液、MgCl₂（5 mM）、NP-40（0.05%）、甘油（2.5%）和poly(dI?dC)（1 μg），在室温孵育20分钟。将未标记寡核苷酸探针（冷探针）（400 pmol）或抗Trps1抗体（500 ng）加入混合物用于竞争 assay或超移反应。然后将混合物加样至4%聚丙烯酰胺凝胶进行电泳。凝胶上的电泳样品转移至尼龙膜（Millipore, Cat# INYC00010），并通过暴露于UV灯将转移的DNA交联至膜。按照制造商说明显色移位条带。

Luciferase assays

将MOVAS以每孔1.5×10⁴个细胞的密度接种于48孔板，培养24小时。然后通过Lipofectamine 3000（Invitrogen, Cat#L300008）将荧光素酶报告载体pGL3-enhancer（200 ng）和Renilla TK（20 ng）共转染至MOVAS。转染24小时后，裂解细胞，并使用Dual-Luciferase Reporter Assay System（Promega, Cat#E1910）在Infinite F Plex酶标仪（Tecan）上测量Firefly和Renilla荧光素酶。荧光素酶活性计算为firefly发光计数与Renilla发光计数的比率。启动子区域合成用于克隆至pGL3-enhancer序列，如AATTACTTTAATAGTGACATGTTTGACTGCCGATTCTTATTTTTTGATCAAGGTAGTGGATCAACCTTGAGAGTTTTCAGTTCTTCAAAATGGAGTTCATGAGTCAGAGCCATTTTCAGG。

Statistics analysis

所有数据表示为平均值±SEM，并使用GraphPad Prism 8软件进行统计分析。使用Student's t检验或ANOVA（单因素或双因素）确定两个或多个比较的统计学显著性。p < 0.05被认为具有统计学意义。p < 0.05；p < 0.01；p < 0.001；p < 0.0001；ns，不显著。误差条描绘SEM。

Results

miPEP31 alleviates Ang II-induced vascular remodeling

为探索其在血管重塑中的作用，我们在Ang II诱导的实验性高血压模型中给小鼠施用合成miPEP31。HE和Masson三色染色显示，与盐水输注对照组（WT-C）相比，Ang II输注小鼠（WT-A）表现出显著增加的主动脉内膜-中膜厚度和胶原沉积，而这些病理变化在miPEP31治疗组（WT-A + miPEP31）中显著减轻，但在乱序肽治疗组（WT-A + scPEP）中未减轻。然后，我们通过应用miPEP31缺陷小鼠剥夺内源性miPEP31。miPEP31缺陷（miPEP31^?/?-A）加剧了Ang II诱导的主动脉内膜和中膜增厚及胶原沉积，在非Ang II输注的miPEP31^?/?小鼠（miPEP31^?/?-C）和野生型小鼠（WT-C）之间未发现差异。这些结果表明，内源性miPEP31对血管重塑起保护作用，而外源性miPEP31给药 alleviates血管重塑。

Expression and penetrating ability of miPEP31 in VSMCs

研究表明，在PDGF-BB诱导的培养大鼠主动脉VSMCs中，miR-31表达上调，且miR-31在VSMCs中起促增殖作用。我们还观察到，在PDGF-BB处理后6小时，小鼠成熟miR-31在MOVAS中的表达显著增加，并在12-24小时保持高水平。因此，我们推测miPEP31可能通过阻止VSMC增殖来改善血管重塑。首先，我们检测了miPEP31在MOVAS细胞中的表达。免疫荧光显示，内源性miPEP31几乎 exclusively在细胞核中表达，呈点状外观，这与miPEP31的转录潜力一致。免疫印迹证实了miPEP31在MOVAS中的表达。为测试外源性miPEP31的核渗透性，我们追踪了在FAM-miPEP31预孵育的、由PDGF-BB诱导的增殖性MOVAS细胞中的FAM荧光。发现FAM信号在MOVAS中 diffuse，并部分在细胞核中呈现点状分布，后者与内源性miPEP31的表达模式相似。对FAM-miPEP31处理的MOVAS进行流式细胞术分析显示，基于FAM-miPEP31的剂量（0、0.5、2和10 μM），FAM强度显著增加。这些数据表明，miPEP31的核表达和外源性miPEP31可能渗透到MOVAS的细胞核中。我们进一步测试了miPEP31在小鼠原代VSMCs中的表达。免疫荧光显示，miPEP31在原代VSMCs中呈点状核定位，与在MOVAS中观察到的相似，而免疫印迹显示，miPEP31在原代VSMCs和MOVAS之间的表达丰度相当。

miPEP31 inhibits VSMCs proliferation in vitro and in vivo

考虑到外源性miPEP31对MOVAS的渗透性，我们然后通过CCK-8 assay研究了miPEP31给药对PDGF-BB诱导的MOVAS增殖的影响。PDGF-BB剂量和时间依赖性地刺激MOVAS增殖，其中在20 ng/ml剂量处观察到峰值诱导。50 μM的miPEP31适度抑制了MOVAS增殖，而75 μM和100 μM的miPEP31表现出更高的抑制效果。在相同剂量（50-100 μM）下，miPEP31对细胞增殖的延缓作用也在原代VSMCs中观察到。miPEP31的生长抑制效应不是由于细胞毒性，因为Annexin V/PI染色显示，在有或无miPEP31诱导的MOVAS细胞之间，Annexin V阳性和Annexin V/PI双阳性细胞群没有差异，即使在100 μM剂量下也是如此，这表明miPEP31几乎不引起细胞凋亡。我们随后通过α-SMA（VSMCs标志物）的免疫荧光染色，在Ang II输注小鼠中检测了miPEP31在VSMC增殖中的体内 effects。miPEP31给药（WT-A + miPEP31）有效降低了Ang II诱导的（WT-A）异常主动脉α-SMA染色，达到与盐水输注对照组（WT-C）相当的水平。总之，这些数据 strongly suggest that miPEP31在体外和体内均抑制VSMC增殖。

miPEP31 co-operates with Trps1 to regulate miR-31 expression and VSMC proliferation

miPEP31是一种低分子量肽，推测其通过与其他转录因子协作发挥转录活性。通过抗miPEP31抗体工程化共免疫沉淀 followed by LC-MS分析miPEP31相互作用蛋白的身份，在筛选的蛋白质中，一个显著的结合伙伴被鉴定为Trps1，这是一种非典型GATA型锌指转录因子。这种GATA家族转录因子在软骨细胞和乳腺上皮细胞增殖中的参与表明，它可能也参与VSMC增殖的调控。然后，我们通过AlphaFold 3系统模拟了小鼠miPEP31-Trps1相互作用模型，并确定了4个潜在的相互作用位点，即Ala44 (miPEP31)-Lys245, Tyr246 (Trps1), Thr34 (miPEP31)-Tyr232 (Trps1), Lys16 (miPEP31)-Asp221 (Trps1) 和 Arg18 (miPEP31)-Tyr1256 (Trps1)。据此，我们假设miPEP31可能通过与Trps1协作调控miR-31转录。

荧光素酶 assay鉴定出从起始密码子开始的-703至-822 bp区域为miR-31启动子的活性转录区域（命名为P_2-3），其中包含一段（命名为P_2-C）涵盖miPEP31在NIH 3T3细胞中的结合 motif。与此一致，在使用MOVAS核提取物的EMSA中，检测到与生物素标记的P_2-C片段反应的移位条带，该条带被未标记的冷探针竞争性消除。添加兔抗Trps1抗体而非非特异性正常兔IgG消除了移位条带，并同时产生了一个极低迁移率的超移位条带。这一发现表明，Trps1可能直接结合MOVAS中的P_2-C区域。然后，我们通过荧光素酶分析在稳定表达靶向Trps1的shRNA（Trps1 shRNA MOVAS）的MOVAS中检测了Trps1对miR-31启动子活性调控的参与。Trps1 shRNA对基础pGL3载体荧光素酶活性没有影响，但将P_2-3区域活性提升至对照shRNA MOVAS的2.2倍。与荧光素酶报告基因 assay的结果一致，Trps1 shRNA MOVAS表现出比对照shRNA MOVAS适度但显著更高的miR-31表达。总之，这些结果表明，Trps1通过与miPEP31协作，在MOVAS中作为miR-31的转录抑制因子发挥作用。

考虑到miPEP31通过抑制miR-31表达可能参与VSMC增殖，推测Trps1将参与VSMC增殖是合理的。为测试这一点，我们首先检测了Trps1在PDGF-BB诱导的增殖性MOVAS中的表达，发现与未刺激对照组相比，在6小时内，Trps1 mRNA和蛋白表达一致地下调了约40%。这些发现表明，Trps1可能抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖。正如预期，细胞周期分析显示，与对照shRNA转染的MOVAS相比，Trps1 shRNA降低了G1期MOVAS群体并增加了S期MOVAS群体，这表明Trps1在MOVAS增殖中起 inhibitory作用。Trps1 shRNA还提高了用PDGF-BB诱导的MOVAS细胞中的PCNA蛋白表达，进一步表明Trps1阻止VSMC增殖。我们进一步测试了外源性miPEP31对MOVAS细胞在响应PDGF-BB诱导时细胞周期进程的影响，发现miPEP31以剂量依赖性方式减少了MOVAS细胞的S期细胞计数，提高了G1期细胞比例，并减弱了PCNA蛋白表达，这与在Trps1 ShRNA MOVAS中观察到的结果一致。总之，miPEP31和Trps1协作结合miR-31启动子区域，抑制miR-31表达，随后抑制VSMC增殖。

Discussion

在本研究中，我们发现施用合成miPEP31减轻了而miPEP31缺陷加剧了Ang II诱导的血管重塑，其通过抑制小鼠VSMCs增殖。miPEP31抑制VSMC增殖的机制涉及miPEP31与转录因子Trps1协作结合miR-31的启动子区域，从而抑制VSMCs中miR-31的表达。

我们最近的研究将miPEP31鉴定为一种潜在的抗高血压治疗剂，因为它能够降低血压，减轻Ang II输注小鼠的肾小球肥大和减少肾纤维化。然而，miPEP31在保护其他高血压靶器官（如血管、心脏和大脑）方面的功效仍不清楚。值得注意的是，血管重塑是动脉对高血压响应的病理结构改变，导致管腔直径和动脉弹性减少，进而导致全身血管阻力长期升高，表明血管重塑不仅是高血压的结果，也是其原因。因此，阐明miPEP31对血管重塑的影响以增强miPEP31作为高血压药物靶点的可用性势在必行。在本研究中，我们发现施用合成miPEP31显著减轻了Ang II输注小鼠的主动脉内膜和中膜厚度及胶原含量，而通过应用miPEP31^?/?小鼠消除内源性miPEP31对盐水输注小鼠的主动脉结构和形态没有影响，但加剧了Ang II输注小鼠的血管重塑。这些数据表明，miPEP31是一种 against病理血管重塑的内源性保护因子，而补充miPEP31减轻了Ang II诱导的血管损伤。总之，miPEP31给药不仅降低血压，而且改善Ang II诱导的小鼠肾脏和血管损伤，表明miPEP31是一种理想的抗高血压治疗剂。

miPEP31由pri-miR-31编码，反过来转录抑制miR-31表达，从而拮抗miR-31功能。已知miR-31在人类和小鼠中抑制T_reg细胞分化，而miPEP31促进T_reg细胞分化。删除miR-31或施用miPEP31一致地降低血压，改变肾脏中T_reg细胞的积累，并减轻Ang II诱导的小鼠肾小球肥大。VSMCs的过度生长是血管重塑中的主要细胞事件，而miR-31在VSMCs中起促增殖作用。发现miR-31在Ang II输注的小鼠主动脉、大鼠球囊损伤的颈动脉、Ang II诱导的小鼠原代VSMCs和PDGF-BB诱导的大鼠原代VSMCs中表达上调。miR-31抑制剂阻断了而miR-31模拟物或通过腺病毒载体过表达miR-31加剧了由Ang II或PDGF-BB诱导的VSMCs增殖。在本研究中，我们发现miR-31在PDGF-BB诱导的小鼠VSMC细胞系MOVAS中表达上调，且miPEP31剂量依赖性地抑制PDGF-BB诱导的VSMCs增殖，并且miPEP31给药减少了Ang II输注小鼠与盐水输注对应组相比的主动脉α-SMA染色面积。因此，我们得出结论，miPEP31通过抑制VSMCs增殖来保护 against血管重塑，可能 via抑制miR-31表达。

miPEP31是一种小肽，不能形成具有埋藏 domain的大球状蛋白质；因此，推测其通过与其他转录因子协作发挥转录活性。通过Co-IP质谱分析，我们发现Trps1在MOVAS中物理结合miPEP31。Trps1是一种非典型GATA家族锌指转录因子。Trps1基因突变引起一种常染色体显性遗传疾病，称为毛发-鼻-指（TRP）综合征，其特征是颅面、毛发和骨骼异常。与临床表现一致，据报道Trps1参与成骨细胞分化、软骨细胞增殖和存活以及触须 follicle形态发生。Trps1也在其他细胞和组织中表达和功能；例如，Trps1对乳腺上皮细胞增殖很重要，从而参与乳腺癌发展。然而，Trps1在VSMCs中的作用从未被研究过。

Trps1通常与辅因子或其他转录因子形成核蛋白复合物，结合顺式元件。已经鉴定出几种Trps1的结合伙伴，包括Runx2、Gli3、RNF4、IRX5-GATA3、CHD4/NuRD复合物等。与