IMOJEV疫苗接种在正黄病毒流行区儿童中诱导对日本脑炎病毒和登革2型病毒的抗体反应研究及其交叉增强风险评价

　　本刊推荐：本研究通过分析菲律宾儿童接种IMOJEV（减毒活疫苗）前后的血清样本，首次系统评估了JEV（日本脑炎病毒）疫苗诱导的DENV2（登革病毒2型）交叉抗体反应特性。研究发现疫苗接种后97%的受试者产生JEV中和抗体（RVPNT50≥10），且预存DENV2结合抗体不影响疫苗应答。虽然ELISA检测到DENV2交叉结合抗体增加，但RVP（报告病毒颗粒）中和与ADE（抗体依赖增强）实验表明未产生显著增强效应，为JEV疫苗在登革流行区的安全应用提供了关键证据。

　　

背景

日本脑炎病毒（JEV）作为一种蚊媒传播的正黄病毒，是亚洲地区病毒性脑炎的主要致病源。虽然99%的感染者无症状，但出现症状的患者中约三分之一会死亡，幸存者多伴有长期神经系统后遗症。菲律宾作为JEV和登革病毒（DENV）共同流行区，尚未将JEV疫苗纳入国家免疫规划，部分源于对登革疫苗Dengvaxia引发的抗体依赖增强（ADE）现象的担忧。本研究旨在阐明IMOJEV疫苗接种是否会诱导针对DENV2的交叉中和或增强抗体。

方法

伦理声明与样本来源

研究使用来自菲律宾大学马尼拉分校牵头队列的生物样本库血清，共29名9-24月龄菲律宾儿童接种IMOJEV疫苗前后的配对样本。IMOJEV是一种以黄热病17D-204病毒为骨架、携带JEV SA-14-14-2疫苗株prM/E基因的嵌合减毒活疫苗。

血清学检测技术

通过DENV2和JEV病毒样颗粒（VLP）IgG ELISA检测结合抗体，使用报告病毒颗粒（RVP）平台进行中和试验（RVPNT₅₀）和ADE assay。RVP通过共转染GFP标记的西尼罗病毒复制子质粒与DENV2（16681株）或JEV（7812474株）结构蛋白质粒在HEK-293T细胞中制备，分别在Raji-DCSIGNR细胞（中和）和K562细胞（增强）中通过流式细胞术检测感染率。

统计分析

ELISA结果以P/N值（样品OD/阴性对照OD）判定反应性，中和效价≥10视为具有中和活性，增强倍数≥2倍视为具有增强活性。采用Student’s t检验和Spearman等级相关进行统计分析。

结果

基线抗体反应特征

疫苗接种前DENV2血清阳性率为28%（8/29），其中12月龄以上组阳性率较高（5/16）。DENV2与JEV VLP ELISA结果显著相关（Spearman r=0.78, p<0.0001），表明JEV ELISA检测主要反映DENV交叉反应而非特异性结合。

疫苗接种应答评估

接种后97%（28/29）的儿童产生JEV中和抗体，几何平均效价为254.7。仅1例（B27）无应答。JEV VLP ELISA虽显示结合抗体显著升高（p=0.001），但仅50%疫苗应答者呈阳性，证实该方法对疫苗诱导抗体的敏感性有限。年龄和预存DENV2结合抗体与JEV疫苗应答强度无显著关联。

交叉抗体功能分析

在17例重点分析的样本中，接种后DENV2结合抗体显著增加（p=0.003）。4例预存DENV2中和抗体的儿童中，3例疫苗应答者（B01、B10、B24）接种后DENV2中和效价轻微上升，而无应答者B27效价下降。ADE assay显示6/7 DENV2反应性血清存在增强活性，但接种前后增强倍数无显著变化（p=0.27）。具有增强非中和特性（E⁺/N^-）的个体表现出较高的JEV疫苗应答趋势。

讨论

本研究首次系统评估了减毒活JEV疫苗在DENV流行区儿童中的交叉抗体效应。关键发现包括：①IMOJEV可高效诱导JEV特异性中和抗体；②预存DENV2抗体不影响疫苗应答；③虽产生DENV2交叉结合抗体，但未导致体外增强现象。这些发现与既往使用灭活疫苗（JEVAX、JEBIK-V）的研究结论存在差异，可能源于疫苗株（SA-14-14-2含L107F突变）和疫苗类型（活疫苗）的特异性。

研究的局限性包括仅聚焦DENV2单一血清型、单时间点检测及样本量较小。虽然RVP平台具有良好的生物安全性，但体外ADE结果与临床严重性的关联仍需进一步验证。

结论与意义

IMOJEV疫苗接种在菲律宾儿童中表现出良好的免疫原性和安全性特征，未发现诱导DENV2抗体依赖增强的证据。该研究为JEV疫苗在正黄病毒共流行地区的推广提供了关键科学依据，对制定公共卫生免疫策略具有重要指导意义。正黄病毒抗体交叉反应研究对疫苗设计和免疫策略优化具有广泛影响。