基于高分辨质谱(HRMS)的青蒿素无标准品代谢物定量新策略及其在肝微粒体与血浆中的应用

　　本研究针对药物代谢研究中无放射性标记或标准品时代谢物定量的难题，开发了一种基于高分辨质谱(HRMS)的创新分析策略。来自未知机构的研究人员通过以青蒿素(ART)为模型药物，首次在人体肝微粒体中鉴定其主要羟基化代谢物M1及次要异构体M2，并利用探针药物（如咪达唑仑）证实羟基化途径的质谱响应比(MRR)稳定性（约0.6倍）。通过模拟计算曲线实现无标准品定量，酶动力学与药代动力学数据偏差小于31.7%。研究发现M1为人体内主要代谢物（暴露量为ART的3.6倍），另一羟基化代谢物M2占比约40.0%。该策略为早期药物研发同时提供代谢物鉴定与定量分析的高效工具。

　　

在缺乏放射性标记类似物或参考标准品的情况下，代谢物的精准定量一直是药物研发领域的重大挑战。一项创新性研究提出基于高分辨质谱(High Resolution Mass Spectrometry, HRMS)的分析策略，可同步实现代谢物谱分析(metabolite profiling)和无标准品代谢物定量(standard-free metabolite quantification)，且对化合物结构限制极小。

以抗疟明星药物青蒿素(Artemisinin, ART)为模型，研究团队首先在人体肝微粒体(human liver microsomes)模型中通过液相色谱-高分辨质谱(LC-HRMS)技术发现其主要羟基化代谢物M1及其次要异构体M2。随后，他们采用多种探针取代基（如咪达唑仑midazolam）探究特定生物基质中羟基化途径的质谱响应比(MS response ratio, MRR)。有趣的是，尽管等摩尔浓度下探针药物及其代谢物的MS响应存在显著波动（0.5–1.9倍差异），羟基化途径的MRR比值却保持相对稳定（约0.6倍）。

基于ART的校准曲线和羟基化途径的MRR比值，研究人员成功构建了M1的模拟计算曲线。该策略在酶动力学和药代动力学研究中展现出高度可靠性——与经过验证的LC-MS技术相比，定量数据偏差小于31.7%。

研究结果揭示：M1是人体内ART的主要代谢物（暴露量为母药的3.6倍），而另一种未明确结构的羟基化代谢物M2的暴露量占比高达40.0%。这项突破性工作证明，结合适当探针取代基评估代谢通路MRR比值的新HRMS策略，有望成为早期药物开发中同步实现代谢物鉴定与定量的强大工具。