靶向ANGPTL4通过抑制Notch信号通路改善Treg/Th17失衡并缓解过敏性鼻炎炎症

　　本研究针对过敏性鼻炎（AR）免疫失衡的治疗难题，研究人员通过动物模型探讨了ANGPTL4基因在AR发病中的作用机制。研究发现，抑制ANGPTL4可显著改善OVA诱导的小鼠AR症状，通过调控Notch信号通路恢复Treg/Th17细胞平衡，降低IL-17等炎症因子水平。该研究为AR的靶向治疗提供了新的理论依据和治疗策略。

　　

过敏性鼻炎（Allergic Rhinitis, AR）是一种常见的免疫系统疾病，属于I型超敏反应，主要影响鼻黏膜，其特征是反复发作的打喷嚏、流清涕和鼻塞。流行病学调查显示，AR影响着20-30%的成年人和高达40%的儿童，不仅严重降低患者的生活质量，还常伴随哮喘、鼻窦炎和结膜炎等并发症。目前，AR的一线治疗多采用鼻用糖皮质激素，但长期使用可能带来一系列不良反应，因此开发更安全有效的治疗方案成为临床研究的迫切需求。

在AR的发病机制中，免疫失衡特别是调节性T细胞（Treg）与辅助性T细胞17（Th17）之间的平衡失调被认为是关键环节。Th17细胞促进炎症反应，而Treg细胞则负责维持免疫耐受，两者失衡会导致慢性炎症及过敏反应的持续。此外，Notch信号通路的异常激活也被发现能够抑制Treg细胞分化，进而加剧Th17/Treg比例失衡，促进AR病情进展。

近年来，血管生成素样蛋白4（Angiopoietin-like 4, ANGPTL4）作为脂质代谢的关键调控因子，逐渐被发现在炎症和免疫调节中扮演重要角色。既往研究表明，ANGPTL4在多种炎症性疾病中表达上调，但其在AR中的作用及机制尚未明确。因此，本研究旨在探究ANGPTL4是否通过调控Notch信号通路影响Treg/Th17平衡，从而参与AR的发生与发展。

本研究通过卵清蛋白（OVA）诱导建立AR小鼠模型，采用组织染色、ELISA、流式细胞术、qPCR和Western blot等技术，系统评估了ANGPTL4沉默对AR症状、炎症反应及免疫细胞平衡的影响，并进一步探讨了其潜在机制。研究发现，ANGPTL4在AR小鼠鼻黏膜中显著上调，其沉默可明显缓解AR症状，改善鼻黏膜病理变化，降低炎症因子水平，并恢复Treg/Th17平衡。机制上，ANGPTL4 knockdown抑制了Notch信号通路关键分子（NOTCH1、JAGGED1、HES1）的表达，而Notch通路激动剂VPΑ可逆转ANGPTL4沉默的保护效应。这些结果提示，靶向ANGPTL4可能通过抑制Notch通路改善AR免疫失衡，为临床治疗提供了新靶点。

本研究发表于《European Journal of Medical Research》，不仅深化了对AR免疫机制的理解，也为开发新的治疗策略提供了实验依据。

本研究采用了以下主要关键技术方法：使用OVA诱导的C57BL/6小鼠AR模型，通过行为学评分评估打喷嚏和搔鼻次数；组织学染色（HE和PAS）分析鼻黏膜病理变化和黏液分泌；ELISA检测血清和鼻灌洗液（NALF）中炎症因子（IL-10、IL-17、TGF-β1）及免疫球蛋白（IgE、IgG1、IgG2a）水平；流式细胞术（FACS）分析淋巴结和NALF中Treg（CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺）和Th17（CD4⁺CD25⁺IL-17⁺）细胞比例；qPCR和Western blot检测鼻黏膜中Notch通路相关基因（NOTCH1、JAGGED1、HES1）及Treg/Th17标志物（Foxp3、IL-10、ROR-γt、IL-17）的表达；通过慢病毒介导的shRNA敲低ANGPTL4，并利用Notch抑制剂DAPT和激动剂VPA进行功能获得和丧失实验。

Presence of Th17-Treg imbalance in OVA-induced AR in mice

通过OVA攻击成功建立AR小鼠模型，模型组小鼠表现出明显的AR样症状，如打喷嚏和搔鼻次数显著增加，鼻黏膜增厚、杯状细胞增多、炎症细胞浸润及黏液分泌增加。血清中IL-17水平升高，而IL-10和TGF-β1水平降低。流式细胞术显示，AR小鼠淋巴结中Treg细胞比例下降，Th17细胞比例上升，证实了Th17-Treg失衡在AR发生中的关键作用。

Notch pathway is activated in OVA-challenged mice and associated with the Th17-Treg imbalance

qPCR和Western blot结果表明，AR小鼠鼻黏膜中Notch信号通路关键分子NOTCH1、JAGGED1和HES1的mRNA和蛋白表达均显著上调。使用Notch特异性抑制剂DAPT处理后，AR症状明显改善，炎症因子水平下降，Treg细胞比例回升，Th17细胞比例下降，表明Notch通路激活与Th17-Treg失衡及AR病情密切相关。

ANGPTL4 is markedly upregulated in OVA-challenged mice

RNA-seq分析发现，ANGPTL4是AR小鼠鼻黏膜中上调最显著的基因之一，qPCR和Western blot进一步验证了其高表达。通过慢病毒介导的shRNA成功敲低ANGPTL4表达，为后续功能实验奠定了基础。

ANGPTL4 silencing alleviates in OVA-induced mice

ANGPTL4沉默后，AR小鼠的打喷嚏和搔鼻行为显著减少，鼻黏膜病理改善，杯状细胞和黏液分泌减少，表明ANGPTL4 knockdown可有效缓解AR症状及病理变化。

ANGPTL4 silencing reduces inflammation induced by OVA

ELISA检测显示，ANGPTL4沉默降低了血清和NALF中IL-17水平，提高了IL-10和TGF-β1水平。同时，炎症细胞（中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞）浸润减少，IgE和IgG1水平下降，IgG2a/IgG1比值升高，表明ANGPTL4 knockdown通过调节免疫球蛋白水平和炎症反应减轻过敏反应。

ANGPTL4 knockdown improves Th17-Treg balance in AR mice

流式细胞术分析表明，ANGPTL4沉默后，淋巴结和NALF中Treg细胞比例显著上升，Th17细胞比例下降。qPCR和Western blot结果显示，鼻黏膜中Treg标志物Foxp3和IL-10表达上调，Th17标志物ROR-γt和IL-17表达下调，证实ANGPTL4 knockdown可恢复Treg/Th17平衡。

ANGPTL4 knockdown improves Treg/Th17 balance by inactivating the Notch pathway

机制研究表明，ANGPTL4沉默抑制了Notch通路关键分子NOTCH1、JAGGED1和HES1的表达。而Notch激动剂VPA处理逆转了ANGPTL4 knockdown的保护效应，导致AR症状加重，炎症因子水平回升，Treg/Th17比例再次失衡，证明ANGPTL4通过调控Notch信号通路影响Treg/Th17平衡和AR进程。

本研究结论表明，ANGPTL4在AR发生发展中表达上调，其沉默可通过抑制Notch信号通路改善Treg/Th17细胞失衡，减轻炎症反应，缓解AR症状。讨论部分强调，ANGPTL4作为连接脂质代谢与免疫炎症的关键因子，其调控机制不仅深化了对AR病理机制的理解，也为开发靶向ANGPTL4的治疗策略提供了重要依据。该研究创新性地揭示了ANGPTL4-Notch轴在AR免疫调节中的作用，为临床干预提供了新思路，具有重要的理论价值和临床应用前景。