基于CRISPR-Cas12a与重组酶辅助扩增（RAA）技术的阴道加德纳菌快速分子诊断新方法

　　本刊推荐：本研究创新性整合重组酶辅助扩增（RAA）与CRISPR-Cas12a基因编辑技术，成功构建了阴道加德纳菌（Gardnerella vaginalis）的快速核酸检测平台。该技术灵敏度达10 copies/mL，对44例临床样本与qPCR对比阳性符合率100%，为细菌性阴道病（BV）的早期筛查提供了高特异性、低成本的新型分子诊断方案。

　　

Highlight

试剂与仪器

阴道加德纳菌液体室内质控品购自毕诺生物（河南省工业微生物菌种工程技术研究中心），LaCas12a蛋白和10×HOLMES Buffer来自拓普生物科技（上海），RAA扩增试剂盒购自杭州众测生物，拭子洗液和细菌DNA试剂盒源于杭州 Simgen 生物试剂开发有限公司。

基于RAA联合CRISPR-Cas12a的阴道加德纳菌基因组检测原理

如图1所示，该检测流程首先从临床阴道拭子样本中提取总细菌基因组DNA，随后以DNA为模板在39°C下进行RAA扩增。扩增产物转入CRISPR-Cas12a反应体系后，Cas12a蛋白在crRNA引导下识别PAM位点并结合靶标DNA，激活其反式切割活性，切割荧光标记的ssDNA报告探针（如FQ-reporters），产生荧光信号。通过实时荧光监测或侧流层析试纸条即可实现可视化读值。

讨论

阴道加德纳菌作为细菌性阴道病（BV）多微生物病因中的关键病原体，其过度增殖会显著破坏阴道微环境，导致乳酸杆菌锐减、阴道pH值升高及致密生物膜形成，构成BV的核心病理基础。最新研究表明，该菌不仅通过分泌唾液酸酶和神经氨酸酶等水解酶破坏宿主防御屏障，还能激活NLRP3炎症小体通路介导IL-1β等促炎因子释放，与早产、HIV感染风险上升及盆腔炎等严重并发症密切相关。

作者贡献声明

童江：原创撰写、方法论、形式分析；张闯：资源支持；王大庆：调查研究；郭子靖：数据整理；郭勇：验证实验；刘华：数据管理；王卓：文稿审阅与经费筹措。

伦理批准声明

本研究使用本院匿名患者的剩余或废弃样本，不影响患者健康与隐私，所有操作均符合南京中医药大学附属苏州中医医院伦理委员会标准及《赫尔辛基宣言》及其后续修正案的伦理规范。

资金来源

本研究由苏州市应用基础研究（医疗卫生）科技创新项目（编号：SYW2024127）资助。

利益冲突声明

作者声明不存在可能被解释为潜在利益冲突的商业或财务关系。