研究MicroRNA-519d-3p通过靶向PFKFB3增强结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil）化疗敏感性的作用

《Clinics》：Investigating the role of MicroRNA-519d-3p in enhancing chemosensitivity of colorectal cancer cells to 5-Fluorouracil through PFKFB3 targeting

　　提高结直肠癌5-FU化疗敏感性的新靶点：miR-519d-3p通过调控PFKFB3抑制细胞增殖并促进凋亡，体内实验验证其协同化疗增强抑癌效果。

　　本研究探讨了miR-519d-3p在结直肠癌（Colorectal Cancer, CRC）细胞对5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil, 5-FU）化疗敏感性中的作用。结直肠癌作为全球第三大常见癌症，其治疗中5-FU已被使用超过60年，但其化疗耐药性问题仍然严重，成为影响治疗效果和患者预后的重要因素。因此，寻找有效的生物标志物和治疗靶点显得尤为关键。尽管miRNA在药物耐药性中扮演了重要角色，但miR-519d-3p在CRC化疗耐药中的具体机制尚不明确。本研究旨在深入探讨miR-519d-3p在CRC细胞对5-FU化疗敏感性中的生物学功能，并揭示其与6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶-3（PFKFB3）之间的关系，以期为CRC的诊断和治疗提供新的思路。

在研究方法方面，研究人员首先构建了5-FU耐药的CRC细胞系，并通过基因测序和实时荧光定量PCR（RT-qPCR）分析了miR-519d-3p的表达差异。结果表明，5-FU耐药细胞系中miR-519d-3p的表达水平显著低于非耐药细胞系。此外，通过生物信息学数据库预测，miR-519d-3p可能调控多个下游靶基因，其中PFKFB3表现出较强的结合亲和力。PFKFB3是PFKFB家族中表达水平最高的成员，具有促进细胞糖酵解的能力。研究还发现，miR-519d-3p可能通过调控PFKFB3影响CRC细胞的化疗敏感性，从而对肿瘤的生长、侵袭和凋亡产生影响。

在实验设计上，研究人员采用了多种方法，包括细胞增殖、侵袭和凋亡的评估，以及PFKFB3与miR-519d-3p的相互作用分析。通过细胞转染技术，研究人员对miR-519d-3p进行了过表达和抑制处理，并观察其对CRC细胞的影响。结果显示，miR-519d-3p的过表达显著提高了CRC细胞对5-FU的敏感性，抑制了细胞增殖和侵袭，并促进了细胞凋亡。同时，PFKFB3的过表达能够逆转miR-519d-3p诱导的5-FU毒性，表明PFKFB3是miR-519d-3p的重要靶基因。

为了进一步验证这些发现，研究人员还进行了体内实验。通过构建裸鼠肿瘤模型，他们发现与单独使用5-FU相比，miR-519d-3p模拟物与5-FU联合治疗的组别表现出更强的抗肿瘤活性。这一结果表明，miR-519d-3p可能通过调控PFKFB3，增强CRC细胞对5-FU的敏感性，并在体内环境中发挥重要作用。

在讨论部分，研究人员指出，化疗耐药是影响CRC治疗效果和患者预后的重要因素。5-FU作为一线化疗药物，其耐药性机制复杂，涉及多种因素，包括药物代谢酶、细胞代谢相关蛋白和药物转运蛋白等。miRNA的异常表达被认为是导致5-FU耐药的重要原因之一。本研究聚焦于miR-519d-3p，发现其在5-FU耐药细胞系中表达水平较低，而过表达miR-519d-3p能够显著提高CRC细胞对5-FU的敏感性，促进细胞凋亡，抑制细胞增殖和侵袭。这表明miR-519d-3p可能通过抑制PFKFB3的表达，增强CRC细胞对5-FU的敏感性。

此外，研究还发现PFKFB3在CRC细胞中表达水平较高，并且其表达水平与患者无病生存期（Disease-Free Survival, DFS）密切相关。PFKFB3的过表达能够降低CRC细胞对5-FU的敏感性，促进细胞增殖并抑制细胞凋亡，而其沉默则表现出相反的效果。这进一步支持了miR-519d-3p通过调控PFKFB3来影响CRC细胞对5-FU的敏感性。在体内实验中，miR-519d-3p模拟物与5-FU联合使用能够显著抑制肿瘤生长，这表明miR-519d-3p可能在临床治疗中具有潜在的应用价值。

综上所述，miR-519d-3p通过调控PFKFB3的表达，影响CRC细胞对5-FU的敏感性，从而在化疗过程中发挥重要作用。这一发现为提高CRC患者对5-FU的化疗敏感性提供了新的靶点和思路。然而，研究仍存在一定的局限性，例如尚未完全揭示miR-519d-3p在CRC中的全部作用机制，以及其在临床中的具体应用价值。未来的研究可以进一步探索miR-519d-3p在不同类型的CRC细胞中的作用，以及其与其他miRNA或信号通路的相互作用，以期为CRC的个体化治疗提供更全面的理论依据和实践指导。