肺炎支原体延伸因子EF-Tu·GDP复合物结构解析及其在蛋白合成与抗菌靶点开发中的意义

　　本综述系统性阐述了肺炎支原体（Mpn）延伸因子EF-Tu的结构特征与功能机制，首次报道了2.24 ?分辨率的EF-Tu·GDP·Mg2+复合物晶体结构，揭示了其通过构象变化调控蛋白翻译循环的分子基础，为开发针对EF-Tu靶点的新型抗支原体药物提供了关键理论依据。

　　

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Material

EF-Tu和EF-Ts编码基因由Genewiz BioTech（中国）合成，两侧带有Xho I和BamH I酶切位点，并插入带有N端GST标签的质粒表达载体pGEX-6p-1。大肠杆菌BL21(DE3)菌株购自TransGen BioTech（中国）。化学试剂包括二磷酸鸟苷、氯化镁、甘油等均购自生工生物（中国）。

Expression and purification of EF-Tu and EF-Ts

编码EF-Tu的质粒转化至大肠杆菌中。

The conservation of elongation factor EF-Tu

支原体包含百余种寄生性细菌[31]，其延伸因子EF-Tu表现出显著的序列保守性，且该保守性与分类层级直接相关。对10种支原体、智人延伸因子eEF-1A、大肠杆菌EF-Tu和肺炎支原体EF-Tu在内的13个代表物种的EF-Tu序列保守性分析显示（图1a）：支原体属内EF-Tu序列变异极低。例如，相似性...

Conclusion

延伸因子EF-Tu在核糖体翻译介导的新蛋白合成过程中起关键作用[41]。作为细菌中最必需的蛋白之一，EF-Tu独特负责将氨基酸-tRNA（aa-tRNA）递送至核糖体进行多肽合成[12]。EF-Tu的任何功能紊乱都会破坏蛋白合成并 consequently 抑制细菌生长。肺炎支原体的周期性流行和复杂致病机制为治疗靶点开发带来重大挑战。