四重荧光定量PCR技术同步检测四种常见牛源病原体的研究与应用

　　本文开发了一种可同步检测牛疱疹病毒4型（BoHV4）、牛短暂热病毒（BEFV）、牛轮状病毒（BRV）和产气荚膜梭菌（CP）的四重qPCR方法。该方法具有高特异性（无交叉反应）、高灵敏度（检测限低至5 copies/μL）和优异重复性（CV<2.26%），成功应用于1012份临床样本筛查，为牛群混合感染的快速诊断与精准防控提供了高效技术支撑。

　　

Highlight

核酸样本与临床样品

来源于牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）、牛副流感病毒3型（BPIV3）、牛呼吸道合胞病毒（BRSV）、牛冠状病毒（BcoV）、溶血曼氏杆菌（MH）、牛支原体（M. bovis）、多杀性巴氏杆菌（PM）、大肠杆菌（E. coli）、金黄色葡萄球菌（S. aureus）及牛分枝杆菌BCG（BCG）的核酸样本此前已分离并保存于本实验室。

引物探针混合与验证

基于四种病原体——牛短暂热病毒（BEFV）、牛疱疹病毒4型（BoHV4）、牛轮状病毒（BRV）和产气荚膜梭菌（CP）的保守基因区域，精心设计了四对特异性引物及相应的TaqMan探针。将所有引物-探针组混合至单一引物池中，以建立多重检测体系。为验证各引物-探针组在多重体系中的效率，使用……

讨论

牛传染病对牛群健康、生产性能及全球畜牧产业的经济可持续性构成重大威胁。其中，牛疱疹病毒4型（BoHV4）在奶牛群中检出频率高，并与繁殖障碍相关，如受孕率降低和早期胚胎死亡（Chastant-Maillard, 2015）。牛短暂热病毒（BEFV）是一种具有经济重要性的虫媒病毒，可通过昆虫媒介传播，引起牛急性发热性疾病……

结论

总而言之，本研究成功开发了一种可同步检测BoHV4、BEFV、BRV和CP的四重qPCR检测方法，具有高特异性、高灵敏度及良好的重复性。该技术能够准确高效地诊断单一感染及混合感染，为牛群疾病监测与管理提供了宝贵工具。其应用有助于及时干预、改善牛群健康策略并提升精准畜牧业水平。