基于斑马鱼模型与四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术的新型SARM托吡鲁胺代谢谱研究及其在反兴奋剂控制中的应用

　　本研究首次采用斑马鱼模型结合高分辨四极杆-静电场轨道阱液质联用技术(Quadrupole Orbitrap LC-MS/MS)，系统解析了新型选择性雄激素受体调节剂(SARM)托吡鲁胺的代谢特征。研究发现16种新型代谢物(T1-T16)及7条主要代谢途径，其中脱氟反应和羟基化为主导代谢机制。T1（三脱氟托吡鲁胺）被确定为关键代谢标志物，为反兴奋剂监测提供了特异性生物标志物和检测框架。

　　

Highlight

Chemicals and reagents

托吡鲁胺（纯度＞98%）购自阿尔塔科学有限公司（天津）。所有液相色谱-质谱联用分析所用溶剂和添加剂均为LC-MS级别，包括甲醇、乙腈、甲酸铵、甲酸（购自赛默飞世尔科技，美国马萨诸塞州）。超纯水（电阻率18.2 MΩ·cm）采用Milli-Q Advantage A10系统（默克密理博，美国）制备。固相萃取（SPE）采用Oasis HLB小柱（3 cc, 60 mg；沃特世公司，北京）。

Parent drug analysis of topilutamide

托吡鲁胺的LC-MS分析显示其去质子化分子离子[M-H]^-位于m/z 402.05099（分子式C₁₃H₁₀F₆N₃O₅，质量偏差Δppm: 2.3），保留时间为8.15分钟。在负离子模式产物离子质谱中，鉴定出四个特征碎片离子：m/z 332.04887（C₁₂H₉F₃N₃O₅, Δppm: 0.3），由中性丢失HCF3（70 Da）形成；m/z 205.02226（C₇H₄F₃N₂O₃, Δppm: 1.6）作为基峰离子，源自苯环邻位酰胺键断裂；m/z 196.02217（C₆H₅F₃NO₃, Δppm: 2.9）则通过差异化裂解途径产生。

Conclusions

本研究首次采用斑马鱼生物模型对托吡鲁胺进行系统性代谢研究，通过七种不同的代谢途径成功鉴定出16种先前未知的代谢物（T1-T16）。研究结果突出显示了还原性脱氟和羟基化作为主要代谢转化途径，其中T1代谢物表现出作为兴奋剂控制潜在生物标志物的重要价值。该综合性质谱解析策略为反兴奋剂监测提供了关键科学依据。