基于胶束电动色谱-紫外检测法测定血浆中亚甲蓝及其脱甲基代谢物的新策略

　　本文开发了利用胶束电动色谱（MEKC）结合紫外检测（292 nm）直接测定血浆中亚甲蓝（MB）的创新方法，通过液液萃取（乙腈/二氯甲烷）和固相萃取（强阳离子交换吸附剂）实现高选择性提取，灵敏度达5.8 ng/mL，准确度97.4–103%，为研究MB药代动力学及代谢机制（如azure A/B检测）提供了可靠技术平台。

　　

Highlight

设备

采用毛细管电泳系统Kapel-205（Lumex，俄罗斯圣彼得堡），使用内径50 μm、总长度38 cm（有效长度31.5 cm）的无涂层硅胶毛细管。在292 nm波长下以10 s^?1频率记录吸收信号。毛细管温度维持在25°C。使用Ecotest-2000 pH计（Econix，莫斯科，俄罗斯）进行pH测量，并采用Lambda EZ 201紫外/可见光谱仪（PerkinElmer，美国康涅狄格州）在663 nm波长下进行光度测定。

蛋白去除

亚甲蓝（MB）在血浆中主要与蛋白质和脂质结合存在[14]，因此第一阶段需将分析物转化为游离形式并同时沉淀蛋白质。虽可使用多种酸（如高氯酸、磺基水杨酸、三氯乙酸（TCA））实现，但我们的预实验表明：在添加100 g/L TCA沉淀含有32 μg/mL MB的血浆蛋白时，95.4±1.5%的MB残留于蛋白沉淀中。因此酸性沉淀法不适用于MB提取。

结论

本研究首次建立了基于溶剂修饰胶束电动色谱（MEKC）的血浆亚甲蓝（MB）测定方法，该方法还可用于内脏器官样本分析和脱甲基代谢物（如azure A、azure B）检测。本技术在所有CE-UV方法中具有最高灵敏度，且与HPLC-UV性能相当。